Différence clé - Clonage vs sous-clonage
Le clonage et le sous-clonage sont des procédures de biologie moléculaire qui créent des cellules ou des organismes génétiquement identiques portant l'ADN ou le gène qui nous intéresse. Le clonage est une technique qui implique l'insertion du gène ou de l'ADN intéressé dans un vecteur, sa réplication dans une bactérie hôte et la production de cellules ou d'organismes qui sont des copies exactes de la constitution génétique. Le sous-clonage est une technique qui implique l'insertion du gène d'intérêt, qui est déjà inséré dans un vecteur, dans un vecteur secondaire, sa réplication dans une bactérie hôte et la production de copies génétiquement identiques de cellules ou d'organismes.le différence clé entre le clonage et le sous-clonage est que, dans le clonage, le gène d'intérêt, une fois ligaturé dans un vecteur, continue le processus de clonage tandis que, dans le sous-clonage, le gène d'intérêt déjà cloné est séparé du vecteur parent et inséré à nouveau dans un vecteur destinataire et continuez le processus.
Qu'est-ce que le clonage ?
Le clonage est la procédure qui produit des organismes ou des cellules génétiquement identiques. Dans la nature, le clonage se produit dans les moyens de reproduction asexuée. Lorsqu'il n'y a pas de recombinaison ou d' altération génétique, les cellules filles reçoivent la même constitution génétique que le parent. Les organismes procaryotes et eucaryotes créent des clones par fission binaire, bourgeonnement, mitose, etc. En biologie moléculaire, le clonage de gènes ou de fragments spécifiques d'ADN est une méthode populaire pour étudier la structure et la fonction de cette section d'ADN particulière.
L'objectif principal du clonage moléculaire est de faire des millions de copies de cellules ou d'organismes génétiquement identiques portant le fragment d'ADN d'intérêt (principalement des gènes). Il crée des organismes avec des copies génétiques exactes d'un autre. Principalement, des gènes spécifiques sont clonés dans des études moléculaires pour obtenir des informations structurelles et fonctionnelles et pour le séquençage de l'ADN. En outre, pour la production de protéines ou de produits spécifiques à grande échelle, le clonage est largement utilisé.
Procédure de clonage
Les étapes de base de la procédure de clonage sont les suivantes.
- Identification et isolement du gène d'intérêt. (Amplification du gène d'intérêt par PCR).
- Digestion de restriction du gène d'intérêt (l'endonucléase de restriction coupe le gène).
- Digestion de restriction de l'ADN vecteur. (L'ADN vecteur est également coupé à l'aide de la même endonucléase de restriction).
- Insertion du gène dans le vecteur et formation de la molécule recombinante.
- Transformation du vecteur recombinant en une bactérie hôte.
- Isolement et identification des bactéries transformées (le vecteur plasmidique doit contenir un gène sélectionnable, le plus souvent un gène de résistance aux antibiotiques pour cribler les bactéries transformées).
- Expression génétique recombinante au sein de l'hôte.
Figure_01: Procédure de clonage
Qu'est-ce que le sous-clonage ?
Le sous-clonage est une procédure consistant à déplacer un gène d'intérêt d'un vecteur à un autre vecteur pour voir l'expression du gène afin d'obtenir la fonctionnalité souhaitée du gène. Dans cette méthode, deux vecteurs sont impliqués; à savoir, le vecteur parent et le vecteur de destination. Les inserts clonés sont à nouveau déplacés dans un second vecteur lors du sous-clonage. L'objectif du transfert du gène du premier vecteur vers le deuxième vecteur est d'obtenir quelque chose qui ne pourrait pas être fait par le premier vecteur ou de séparer à nouveau un gène au sein du fragment d'ADN déjà cloné et de l'exprimer seul. Des enzymes de restriction sont utilisées dans cette procédure au début.
Procédure de sous-clonage
Les étapes de base du sous-clonage sont les suivantes.
- À l'aide d'endonucléases de restriction, séparation de l'ADN d'intérêt dans le plasmide donneur (vecteur parent).
- Amplification de l'ADN d'intérêt par PCR.
- Purification du produit PCR (ADN d'intérêt) par électrophorèse sur gel.
- Ouverture du plasmide receveur par les mêmes endonucléases de restriction utilisées pour séparer l'ADN d'intérêt dans le plasmide parent.
- Ligation de l'ADN d'intérêt (gène) dans le plasmide receveur pour créer le plasmide sous-cloné.
- Transformation du vecteur sous-cloné en une bactérie hôte compétente.
- Criblage des cellules transformées.
- Purification de l'ADN plasmidique et utilisation pour le séquençage de l'ADN ou l'expression des gènes afin d'obtenir les produits souhaités.
Le sous-clonage est effectué à l'occasion de l'isolement d'un gène du groupe de gènes cloné ou lorsque le gène d'intérêt doit être transféré dans un plasmide utile pour voir la fonction exacte du gène d'intérêt.
Figure_02: Procédure de sous-clonage
Quelle est la différence entre le clonage et le sous-clonage ?
Clonage vs sous-clonage |
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| Le clonage est la procédure qui produit des organismes ou des cellules génétiquement identiques. | Le sous-clonage est une procédure consistant à déplacer un gène d'intérêt d'un vecteur à un autre vecteur pour voir l'expression du gène afin d'obtenir la fonctionnalité souhaitée du gène. |
| Processus | |
| Séparer l'ADN d'intérêt de l'organisme et l'insérer une fois dans un vecteur et le cloner | L'ADN déjà cloné est séparé du premier vecteur et inséré dans un deuxième vecteur et cloné. |
| Insérer un mouvement via des vecteurs | |
| Ne déplace pas les inserts (ADN d'intérêt) d'un vecteur à un autre vecteur. | Déplacer les insertions du vecteur parent vers le vecteur de destination. |
Résumé - Clonage vs sous-clonage
Le clonage crée des cellules ou des organismes génétiquement identiques avec le gène inséré ou l'ADN d'intérêt. Il procède par la séparation et l'insertion de l'ADN d'intérêt dans un vecteur et l'expression au sein d'une bactérie hôte. Le sous-clonage partage des étapes similaires avec le clonage. Cependant, lors du sous-clonage, un fragment d'ADN déjà cloné (gène d'intérêt) est inséré dans un vecteur et transformé dans une bactérie hôte. C'est la principale différence entre le clonage et le sous-clonage.
