Différence clé - Trypsinisation chaude vs froide
La trypsinisation à chaud et à froid sont deux méthodes utilisées dans la désagrégation enzymatique des cellules dans la culture de cellules animales. La principale différence entre la trypsinisation chaude et froide, comme leurs noms l'indiquent, dépend de la température à laquelle la trypsine est ajoutée pour la désagrégation cellulaire. La trypsination à chaud a lieu dans des conditions de température plus élevée (36,5 - 37 0C) tandis que la trypsination à froid a lieu dans des conditions de basse température.
Au cours du processus de culture de cellules primaires de cellules animales, trois méthodes principales sont utilisées et se sont révélées efficaces. Les trois méthodes comprennent la désagrégation mécanique des cellules, la désagrégation enzymatique des cellules et la technique d'explantation primaire. La désagrégation enzymatique des cellules conduit à l'isolement des cellules et est effectuée par la trypsine, une enzyme dégradant les protéines. Par conséquent, ce processus est connu sous le nom de trypsinisation. La trypsinisation peut être effectuée dans deux conditions différentes, à savoir la trypsinisation à chaud et la trypsinisation à froid. La trypsinisation à chaud est la méthode de traitement des cellules avec de la trypsine dans des conditions chaudes à une température de 36,5 à 37 0C. La trypsinisation à froid est le processus de traitement à la trypsine qui a lieu dans des conditions plus froides, de préférence dans de la glace en maintenant des températures très basses.
Qu'est-ce que la trypsinisation à chaud ?
La trypsinisation peut être effectuée pour désagréger les composants cellulaires afin d'isoler les cellules pour produire une culture cellulaire primaire. La trypsine est une enzyme de dégradation des protéines et le mélange d'enzymes utilisé dans la trypsinisation peut être soit un extrait brut, soit un produit purifié. On dit que l'extrait brut est plus efficace dans la lyse des protéines et la désintégration cellulaire car il contient d'autres enzymes de dégradation.
La trypsinisation à chaud est la méthode enzymatique la plus couramment utilisée pour la désagrégation cellulaire qui a lieu dans des conditions de température plus élevées. Avant le traitement par trypsinisation, le tissu souhaité est découpé en petits morceaux. Il facilite le processus de désagrégation facile. Le tissu haché est ensuite lavé dans un milieu spécial connu sous le nom de milieu Dissection Basal S alt.
À la fin de l'étape de lavage, les cellules sont transformées dans un flacon contenant l'enzyme active, qui est la trypsine. Comme cette technique implique un protocole de trypsinisation à chaud, la trypsine est placée à une température d'environ 37 0C pendant environ quatre heures.
Figure 01: Trypsine
Le contenu est mélangé et agité en utilisant des méthodes de centrifugation pour faciliter le protocole et accélérer le processus de désagrégation. Une fois le temps recommandé atteint, les cellules peuvent être dérivées du surnageant. Les cellules issues du surnageant sont ensuite incubées à une température et une durée particulières.
Qu'est-ce que la trypsinisation à froid ?
La trypsinisation à froid est l'autre type de trypsinisation qui a lieu dans des conditions froides. Dans cette technique, les cellules hachées et lavées sont placées dans des flacons sur de la glace puis imbibées de trypsine. La période de trempage est beaucoup plus longue – environ 6 à 24 heures.
Après la fin de la procédure de trempage, la trypsine est retirée du lysat cellulaire et les morceaux de tissu sont encore incubés à 37 0C pendant environ 20 à 30 minutes. La désagrégation des cellules est provoquée par des pipetages répétés du mélange tissulaire. Cela permettra aux cellules de se dissocier de la membrane et de venir dans le surnageant. Une fois que les cellules sont dans le surnageant, elles sont incubées et cultivées à la température et à la durée souhaitées.
La méthode de trypsinisation à froid présente plusieurs avantages
- Rendement plus élevé de cellules viables car les dommages cellulaires sont minimisés. Les dommages cellulaires sont minimisés en n'utilisant pas d'étapes de centrifugation.
- Méthode très pratique.
- Moins laborieux.
La principale limitation de la méthode de trypsinisation à froid est que de grandes quantités ne peuvent pas être utilisées en une seule fois.
Quelles sont les similitudes entre la trypsinisation chaude et froide ?
- Les processus de trypsinisation à chaud et à froid utilisent l'enzyme trypsine pour la désagrégation des cellules.
- Les processus de trypsinisation à chaud et à froid sont utilisés dans les procédures de culture cellulaire pour la désagrégation des cellules.
- Dans les procédures de traitement par trypsinisation chaude et froide, les cellules sont dérivées du surnageant.
Quelle est la différence entre la trypsinisation chaude et froide ?
Trypsinisation chaude vs froide |
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| La trypsinisation à chaud est la méthode de traitement des cellules avec de la trypsine dans des conditions chaudes à une température de 36,5 à 37 °C 0. | La trypsinisation à froid est le processus de traitement à la trypsine qui a lieu dans des conditions plus froides, de préférence dans de la glace en maintenant des températures très basses. |
| Protocole | |
| Les morceaux de tissu hachés sont maintenus à 37 0C en continu tout au long de la procédure. | Les morceaux de tissu hachés sont initialement maintenus à des températures glacées, puis maintenus à 37 0. |
| Température | |
| La trypsinisation à chaud se produit à 36,5 – 37 0 | La trypsination à froid se produit à des températures glaciales. |
| Temps consommé | |
| Moins de temps requis pour l'ensemble du processus (environ 4 heures) de trypsination à chaud. | Plus de temps nécessaire (environ 6 à 24 heures) pour la trypsinisation à froid. |
| Rendement des cellules viables | |
| Faible en trypsinisation à chaud. | Haut en trypsinisation à froid. |
| Utilisation de la centrifugation | |
| La centrifugation est nécessaire pour la désagrégation des cellules dans la trypsinisation à chaud. | La centrifugation n'est pas nécessaire dans la trypsinisation à froid. |
| Quantité initiale de tissu pour la trypsinisation | |
| Une plus grande quantité de tissu peut être utilisée dans la trypsinisation à chaud. | Une plus petite quantité de tissu peut être utilisée dans la trypsinisation à froid. |
| Dégâts cellulaires | |
| Élevé en raison de la centrifugation dans la trypsinisation à chaud. | Moins dû à la trypsinisation à froid. |
Résumé - Trypsinisation chaude vs froide
La trypsinisation est la méthode d'utilisation de la trypsine, une enzyme dégradant les protéines, pour la désagrégation et la préparation de cultures cellulaires primaires au cours du processus de culture cellulaire. Il existe deux techniques principales de trypsinisation basées sur les températures utilisées au cours de la procédure. Ce sont la trypsination chaude et froide. La trypsinisation à chaud est effectuée à 37 0C tandis que la trypsinisation à froid est effectuée dans des conditions glacées. Bien que la trypsinisation à froid prenne plus de temps, on dit qu'elle a un rendement plus élevé de cellules viables. Cela est dû au fait que les dommages cellulaires sont minimisés dans la trypsinisation à froid car elle n'utilise pas d'étapes de centrifugation vigoureuses. C'est la différence entre la trypsinisation chaude et froide.
