La principale différence entre le fragment de Klenow et l'ADN polymérase 1 est que le fragment de Klenow est une grande partie de l'ADN polymérase 1 qui n'a pas d'activité exonucléase 5 'à 3' tandis que l'ADN polymérase est une enzyme d'E. coli qui possède les trois domaines comprenant une activité exonucléase 5′ à 3′.
L'ADN polymérase est l'une des principales enzymes impliquées dans la réplication de l'ADN dans les organismes vivants. Il existe différentes formes d'enzyme ADN polymérase trouvées chez les eucaryotes et les procaryotes en fonction de la taille et de la forme. Les ADN polymérases 1, 2 et 3 ne se trouvent que dans les organismes procaryotes et jouent des rôles différents dans la réplication de l'ADN. L'ADN polymérase 1 a trois domaines avec une activité polymérase 5 'à 3', une activité exonucléase 3' à 5' et une activité exonucléase 5' à 3'. Le fragment de Klenow est un produit protéolytique de l'ADN polymérase 1. Il possède des activités 5 à 3′ polymérase et 3′ à 5′ exonucléase de l'ADN polymérase 1 intacte, mais il lui manque l'activité 5′ à 3′ exonucléase.
Qu'est-ce qu'un fragment de Klenow ?
Le fragment de Klenow est une grande partie de l'ADN polymérase 1. Contrairement à l'ADN polymérase 1, l'activité d'exonucléase 5 'à 3' n'est pas observée dans le fragment de Klenow car il manque le domaine exonucléase avant 5' à 3'. Les fragments de Klenow sont produits en digérant l'ADN polymérase 1 avec une protéase appelée subtilisine, qui est une enzyme digérant les protéines. Dans certaines applications, l'activité exonucléase 3' à 5' du fragment de Klenow devient indésirable. Il peut être éliminé en introduisant une mutation dans le gène qui code pour le fragment de Klenow. L'enzyme résultante qui n'a que l'activité polymérase 5 'à 3' est connue sous le nom de fragment exo-Klenow. Morphologiquement, le fragment de Klenow ressemble à la main droite humaine. Il possède un domaine exonucléase N-terminal 3′-5′ et le domaine polymérase C-terminal séparés par environ 30 A.
Figure 01: Fragment de Klenow et ADN polymérase 1
Le fragment de Klenow est un outil important dans les techniques de biologie moléculaire. Les fragments de Klenow ont de multiples usages. Ils sont extrêmement importants dans le clonage à extrémités franches afin de produire des fragments émoussés. Les fragments de Klenow peuvent supprimer les surplombs 3 'ou remplir les surplombs 5' pour former des extrémités franches. De plus, les fragments de Klenow sont utilisés pour synthétiser de l'ADN double brin à partir de simples brins. De plus, ils sont utilisés pour préparer des sondes marquées radioactivement en utilisant l'activité ADN polymérase dépendante de l'ADN 5' à 3'.
Qu'est-ce que l'ADN polymérase 1 ?
L'ADN polymérase 1 (Pol 1) est une enzyme trouvée chez les procaryotes qui est nécessaire à la réplication de l'ADN bactérien. C'est le premier type d'ADN polymérase découvert par Arthur Kornberg en 1956. Pol 1 est la polymérase la plus abondante chez E. coli. Il est codé par le gène polA et composé de 928 acides aminés. Il se compose de trois domaines. Les trois domaines remplissent des fonctions distinctes. Deux domaines exercent une activité exonucléase 5' à 3' et une activité exonucléase 3' à 5'. En raison de cette activité possédée par Pol 1, elle est populaire en tant qu'enzyme de réparation de l'ADN plutôt qu'en tant qu'enzyme de réplication de l'ADN. Le troisième domaine a la capacité de catalyser plusieurs polymérisations (5 'à 3') avant la libération de l'ADN matrice et de connecter les fragments d'Okazaki ensemble en remplissant un nouvel ADN et en supprimant les amorces d'ARN.
Figure 02: ADN polymérase
Pol 1 isolé de E Coli a été largement utilisé dans les applications moléculaires. Cependant, une fois que la Taq Polymerase a été découverte, elle a remplacé le E Coli Pol 1 dans la technologie PCR. La Taq polymérase est une sorte d'ADN polymérase thermostable qui appartient à Pol 1.
Quelles sont les similitudes entre le fragment de Klenow et l'ADN polymérase 1 ?
- Le fragment de Klenow est une grande partie de l'ADN polymérase 1.
- Ils ont une activité ADN polymérase dépendante de l'ADN 5'à 3' et une activité exonucléase 3'à 5' qui médient la relecture.
- Ils sont utilisés à des fins multiples.
Quelle est la différence entre le fragment de Klenow et l'ADN polymérase 1 ?
La principale différence entre le fragment de Klenow et l'ADN polymérase 1 est que le fragment de Klenow n'a pas d'activité exonucléase 5′ à 3′ tandis que l'ADN polymérase 1 a une activité exonucléase 5′ à 3′. Par conséquent, le fragment de Klenow a deux domaines, tandis que l'ADN polymérase 1 a les trois domaines.
L'infographie ci-dessous montre plus de détails sur la différence entre le fragment de Klenow et l'ADN polymérase 1.
Résumé - Fragment de Klenow vs ADN polymérase 1
L'ADN polymérase 1 est une enzyme d'E. coli qui possède trois domaines comme domaine de polymérisation 5′ à 3′, domaine exonucléase 3′ à 5′ et domaine exonucléase 5′ à 3′. Le fragment de Klenow est une grande partie de l'ADN polymérase. Il manque un domaine de l'ADN polymérase 1, qui est le domaine exonucléase 5 'à 3'. le différence clé entre le fragment de Klenow et l'ADN polymérase 1 est que les fragments de Klenow n'ont pas de domaine exonucléase 5 'à 3' tandis que l'ADN polymérase 1 a un domaine exonucléase 5' à 3'.
