Différence clé - Phusion vs Taq Polymerase
Les ADN polymérases sont des enzymes largement utilisées dans les techniques de biologie moléculaire et sont également naturellement présentes dans tous les organismes qui subissent la réplication de l'ADN. Ce sont les principales enzymes de polymérisation impliquées lors de la réplication. L'ADN polymérase est capable d'ajouter des nucléotides à l'extrémité 3 'libre du brin d'ADN, provoquant ainsi l'extension d'un nouveau brin. Actuellement, en raison des développements de la biologie moléculaire dans le diagnostic des maladies et les applications industrielles, il est important de fabriquer des polymérases ayant diverses propriétés bénéfiques. Cela augmente la précision de la méthode et en fait une technique plus rapide. Phusion et Taq polymérase sont deux enzymes polymérases thermostables produites dans le commerce qui sont utilisées dans des applications moléculaires spéciales. Phusion est une ADN polymérase isolée de Pyrococcus furiosus et est principalement utilisée dans des expériences de clonage pour augmenter la fidélité. La Taq ADN polymérase est l'ADN polymérase standard utilisée dans la réaction en chaîne par polymérase (PCR), et elle est isolée de la bactérie thermostable; Thermus aquaticus. La principale différence entre les deux enzymes est le micro-organisme source. Phusion est isolé de l'extrêmophile, Pyrococcus furiosus, tandis que la polymérase Taq est isolée du thermophile, Thermus aquaticus.
Qu'est-ce que Phusion ?
Phusion L'ADN polymérase est une nouvelle polymérase fabriquée en isolant l'enzyme de Pyrococcus furiosus, qui est une archée extrêmophile. Ces microbes résident dans des conditions de température extrêmement élevée, faisant ainsi de la polymérase une polymérase hautement thermostable. La polymérase Phusion est utilisée pour obtenir une fidélité extrême par rapport à la polymérase thermostable conventionnelle; Taq polymérase. La phusion polymérase est capable d'amplifier de longues matrices jusqu'à 7,5 kb d'ADN génomique. La capacité de polymérisation optimale de la Phusion polymérase est à 720 C. Phusion est également utilisé dans le clonage de produits pour le séquençage, l'analyse d'expression et l'analyse de mutation.
Phusion DNA polymérase a l'activité d'exonucléase 3' - 5'. Cela permet la relecture du brin nouvellement synthétisé après la synthèse. Par conséquent, les mésappariements de nucléotides sont facilement réparés. Ainsi, il a un taux d'erreur moindre. Les avantages généraux de la polymérase Phusion sont;
- Fidélité extrême
- Haute vitesse et temps d'extension réduit
- Réactions robustes et nécessite une optimisation minimale
- Rendement élevé
Figure 01: Phusion
Le principal inconvénient de la Phusion polymérase est qu'elle est inhibée en présence de désoxyuridine triphosphate (dUTP). Lorsque les dUTP s'accumulent dans le mélange réactionnel, cela peut inhiber les actions de la Phusion polymérase. Ceci est évité en traitant le mélange réactionnel avec de la dUTPase avant d'ajouter l'enzyme. À l'heure actuelle, une variante résistante au dUTP de la Phusion polymérase connue sous le nom de Pfu Turbo est utilisée à la place de la Phusion polymérase pour remédier à ce problème.
Qu'est-ce que la Taq polymérase ?
Taq L'invention de l'ADN polymérase a révolutionné le domaine de la biologie moléculaire. Il a résolu un problème majeur dans l'amplification de l'ADN. La Taq ADN polymérase est une enzyme polymérase stable à la chaleur extraite et isolée de la bactérie thermophile Thermus aquaticus. La découverte de ces enzymes conduit au développement de la PCR. Cette enzyme a permis l'utilisation de la réaction en chaîne par polymérase dans l'amplification de l'ADN au lieu des techniques de clonage laborieuses conventionnelles. La PCR est maintenant utilisée dans les domaines du diagnostic moléculaire, de l'agriculture et de l'industrie avec de nombreuses nouvelles variantes ajoutées à la technique.
Figure 02: Taq polymérase
Taq ADN polymérase fonctionne dans la plage de température optimale entre 720C – 800C. L'ADN polymérase Taq nécessite un cofacteur; magnésium pour sa fonction. La polymérase Taq n'a pas la capacité de relecture 3 '- 5 ', par conséquent, le taux d'erreur de l'ADN polymérase Taq est élevé par rapport à des types d'ADN polymérase plus récents tels que la polymérase Phusion, etc. Mais, la popularité de l'ADN polymérase Taq reste la même à travers le monde de la science en raison de la commodité et de la flexibilité de l'enzyme.
Quelles sont les similitudes entre la Phusion et la polymérase Taq ?
- Les enzymes polymérases Phusion et Taq sont des enzymes de polymérisation capables d'ajouter des nucléotides à l'extrémité libre 3' du brin d'ADN.
- Les polymérases Phusion et Taq nécessitent une séquence d'amorce pour initier la polymérisation.
- Les polymérases Phusion et Taq sont thermostables.
- Les polymérases Phusion et Taq sont utilisées dans les mécanismes de PCR pour amplifier l'ADN.
- Lors de l'ajout de la polymérase au mélange réactionnel, les polymérases Phusion et Taq sont ajoutées en dernier pour garantir l'efficacité de l'enzyme.
- Les polymérases Phusion et Taq sont synthétisées commercialement à des fins expérimentales de biologie moléculaire.
- Les polymérases Phusion et Taq nécessitent un cofacteur pour compléter leur fonction.
Quelle est la différence entre la Phusion et la Taq Polymerase ?
Phusion vs Taq Polymerase |
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| Phusion est une ADN polymérase isolée de Pyrococcus furiosus et est principalement utilisée dans les expériences de clonage pour augmenter la fidélité. | Taq DNA Polymerase est l'ADN polymérase standard utilisée dans la réaction en chaîne par polymérase (PCR), et elle est isolée de la bactérie thermostable, Thermus aquaticus. |
| Organisme source | |
| Phusion est extraite des archées extrêmophiles – Pyrococcus furiosus. | Ces œuvres littéraires s'étendent de la période de la colonisation à la période de la décolonisation. |
| Capacité de relecture | |
| 3’ – 5’ capacité de relecture est présente dans Phusion. | 3' - 5' capacité de relecture est absente de la polymérase Taq. |
| Fidélité | |
| La haute fidélité est là avec Phusion. | Taq polymérase montre une faible fidélité. |
| Amplification | |
| Phusion est capable d'amplifier de longs fragments d'ADN. | Taq polymérase est capable d'amplifier des fragments d'ADN beaucoup plus courts. |
| Empoisonnement dUTP | |
| L'action de la pulsion est inhibée par l'accumulation impaire. | Taq polymérase n'est pas inhibée par dUPT. |
Résumé - Phusion vs Taq polymérase
Phusion et Taq ADN polymérase sont deux polymérases thermostables utilisées dans les techniques de PCR. Phusion est une polymérase isolée de l'extrêmophile Pyrococcus furiosus, tandis que Taq est isolée de la bactérie thermostable Thermus aquaticus. La découverte de l'ADN polymérase Taq conduit à l'invention de la PCR. Phusion présente de nombreux avantages par rapport à Taq, ce qui a fait de Phusion une meilleure option pour produire de l'ADN haute fidélité. Cependant, la polymérase Taq est toujours utilisée comme enzyme polymérase standard dans la PCR. C'est la différence entre Phusion et la polymérase Taq.
