Différence clé - Blunt vs Sticky End Ligation
Les endonucléases de restriction sont des enzymes spécifiques qui coupent l'ADN double brin (dsDNA). Ils sont également connus sous le nom de ciseaux moléculaires en biologie moléculaire. Les enzymes de restriction sont capables de reconnaître de courtes séquences spécifiques de l'ADNdb appelées sites de reconnaissance et de cliver les liaisons phosphodiester et hydrogène pour ouvrir les doubles brins. À la suite du clivage par ces enzymes, des fragments d'ADN sont produits avec différents types d'extrémités telles que des extrémités collantes et des extrémités franches. L'ADN ligase est une enzyme utilisée en biologie moléculaire pour joindre deux brins d'ADN adjacents en formant de nouvelles liaisons. L'étape est connue sous le nom de ligature et selon le type d'extrémité d'ADN ligaturée, on peut les appeler ligature des extrémités franches et ligature des extrémités collantes. le différence clé entre la ligature des extrémités franches et collantes est que la ligature des extrémités franches se produit entre des fragments d'ADN contenant deux extrémités franches, tandis que la ligature des extrémités collantes se produit entre les surplombs 5 'et 3'. Par rapport à la ligature des extrémités franches, la ligature des extrémités collantes est plus efficace et stable.
Qu'est-ce qu'une ligature à bout franc ?
Certaines endonucléases de restriction peuvent couper l'ADN aux bases opposées et produire des fragments d'ADN à extrémités franches. Ces enzymes sont connues sous le nom de coupeurs d'extrémité émoussée; ils se clivent directement jusqu'au milieu du site de restriction sans laisser de bases en surplomb monocaténaires. Les extrémités émoussées sont également connues sous le nom d'extrémités non en surplomb car elles n'ont pas de bases en surplomb de 3' et 5' aux extrémités. Les deux brins se terminent à partir de paires de bases par des extrémités franches. Les enzymes communes coupant les extrémités franches sont EcoRV HaeIII, AluI et Smal.
La ligature des extrémités franches est impliquée entre deux extrémités franches. Ce n'est pas une ligature de bases saillantes. Cette ligature est moins efficace que la ligature des extrémités collantes. Cependant, dans certaines occasions, la ligature des extrémités franches devient plus avantageuse que la ligature des extrémités collantes, en particulier lors de la ligature des produits PCR. Les produits PCR sont toujours fabriqués avec des extrémités franches. La ligature des extrémités franches ne nécessite pas d'extrémités complémentaires dans l'ADN pour la ligature.
Figure 01: Production d'extrémités franches par l'enzyme Eco RV
Qu'est-ce qu'une ligature collante ?
Certaines endonucléases de restriction sont capables de couper l'ADNdb, laissant un morceau d'ADN simple brin en surplomb à l'extrémité. Ces extrémités sont appelées extrémités collantes ou en surplomb. La ligature des extrémités collantes se produit entre deux fragments d'ADN qui contiennent des surplombs correspondants car les extrémités collantes possèdent des bases non appariées et nécessitent des bases complémentaires pour former des liaisons. Par conséquent, il est nécessaire d'utiliser la même enzyme de restriction pour les deux sources d'ADN afin de produire les fragments de ligature correspondants.
La ligature des extrémités collantes est plus efficace et est souvent hautement souhaitable dans les processus de clonage. Il existe plusieurs enzymes de restriction qui produisent des extrémités collantes. Ce sont EcoRI, BamHI, HindIII etc.
Figure 02: Production d'extrémité collante par l'enzyme Eco RI
Quelle est la différence entre la ligature des extrémités émoussées et collantes ?
Blunt vs Sticky End Ligation |
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| La ligature des extrémités franches se produit entre deux fragments d'ADN à bouts francs. | La ligature des extrémités collantes se produit entre deux fragments d'ADN correspondants avec des extrémités collantes. |
| Enzymes | |
| Les couteaux à bouts émoussés produisent des bouts émoussés. | Les coupe-extrémités collantes produisent des extrémités collantes ou cohésives. |
| Exigence de correspondance des extrémités | |
| Il ne nécessite pas de fragments correspondants ou de bases complémentaires. | Il nécessite des bases complémentaires aux extrémités pour former des paires de bases. |
| Efficacité | |
| C'est moins efficace que la ligature collante | C'est plus efficace que la ligature à bouts francs. |
Résumé - Ligature Blunt vs Sticky End
Les endonucléases de restriction sont capables de cliver l'ADNdb et de produire des fragments d'ADN avec des extrémités différentes. Ils reconnaissent des séquences spécifiques et restreignent l'ADN en créant des extrémités collantes et émoussées. Les extrémités collantes ont des bases non appariées à la fin des fragments. Les extrémités franches sont créées en raison d'un clivage droit et elles ont des paires de bases aux extrémités. La ligature des extrémités collantes nécessite deux morceaux d'ADN simple brin complémentaires. La ligature des extrémités franches se produit entre deux fragments d'extrémités franches. C'est la différence entre la ligature contondante et collante.
