La principale différence entre les sondes radioactives et non radioactives est que les sondes radioactives sont des séquences d'ADN ou d'ARN simple brin marquées avec des isotopes radioactifs, tandis que les sondes non radioactives sont des séquences d'ADN ou d'ARN simple brin marquées avec une étiquette chimique ou une étiquette fluorescente.
L'hybridation d'acides nucléiques est une technique importante en biologie moléculaire, en particulier dans le diagnostic microbien. Il aide à identifier ou à détecter une séquence d'acide nucléique particulière. Dans cette technique, les acides nucléiques sont fixés sur une surface solide et hybridés avec une sonde. Une sonde est un fragment d'ADN ou d'ARN complémentaire d'une séquence d'intérêt. Si la séquence cible est présente dans l'échantillon, la sonde s'hybridera avec elle et la rendra détectable. Il existe deux types de sondes en tant que sondes radioactives et non radioactives. Par conséquent, nous pouvons étiqueter les sondes avec une étiquette radioactive ou une étiquette fluorescente.
Que sont les sondes radioactives ?
Les sondes radioactives sont des fragments d'ADN ou d'ARN simple brin avec une étiquette radioactive. Les radio-isotopes sont utilisés dans la préparation de sondes radioactives. Les radio-isotopes 32P, 33P et 35S sont couramment utilisés dans le marquage des sondes. De plus, les radio-isotopes 3H et 1251 sont également utilisés dans une moindre mesure dans le marquage des sondes. Mais ils sont utilisés pour des applications spécifiques. Parmi les différents radio-isotopes, 32P est l'isotope le plus couramment utilisé pour marquer les sondes radioactives.
Les sondes radioactives offrent un degré supérieur de fiabilité et de spécificité. Par conséquent, ils offrent une sensibilité maximale et permettent une quantification précise des séquences cibles. Cependant, il existe plusieurs inconvénients associés aux sondes radioactives. Ils ont de courtes demi-vies. De plus, ils sont dangereux et la production, l'utilisation et l'élimination sont problématiques lors de la manipulation. De plus, la préparation des sondes radioactives est un processus coûteux. Par conséquent, en raison des problèmes de sécurité et du coût, les sondes radioactives ne sont plus utilisées de nos jours comme sondes non radioactives.
Que sont les sondes non radioactives ?
Les sondes non radioactives sont le deuxième type de sondes chimiquement marquées. La digoxigénine est une sonde non radioactive, qui est un marqueur à base d'anticorps. Les sondes de digoxigénine sont spécifiques et sensibles. La biotine est un autre marqueur utilisé dans la préparation de sondes non radioactives. Les systèmes de détection biotine/streptavidine et digoxigénine/anticorps sont les sondes non radioactives les plus couramment utilisées en hybridation. En outre, le système de peroxydase de raifort est un autre système de sonde non radioactif. Une fois que ces sondes non radioactives sont hybridées avec les séquences cibles, elles peuvent être détectées par autoradiographie ou d'autres techniques d'imagerie.
Figure 01: Hybridation avec des sondes non radioactives
Les sondes non radioactives sont plus souvent utilisées dans l'hybridation des acides nucléiques que les sondes radioactives. En effet, les sondes non radioactives ne sont pas associées à des matières dangereuses. De plus, les méthodes de détection non radioactives nécessitent des temps d'exposition plus courts pour détecter le signal d'hybridation. Cependant, les étapes impliquées dans l'hybridation de l'ADN avec des sondes non radioactives sont généralement fastidieuses et chronophages. De plus, les solutions disponibles dans le commerce sont chères.
Quelles sont les similitudes entre les sondes radioactives et non radioactives ?
- Les sondes radioactives et non radioactives sont deux types de sondes utilisées dans l'hybridation des acides nucléiques.
- Ils facilitent la détection des séquences cibles dans l'échantillon.
- Les deux types de sondes sont tout aussi sensibles et spécifiques.
Quelle est la différence entre les sondes radioactives et non radioactives ?
Les sondes radioactives sont les séquences d'ADN ou d'ARN simple brin marquées avec des isotopes radioactifs, tandis que les sondes non radioactives sont les séquences d'ADN ou d'ARN simple brin marquées avec une étiquette chimique. C'est donc la principale différence entre les sondes radioactives et non radioactives. De plus, les isotopes radioactifs sont dangereux. Par conséquent, les sondes radioactives sont considérablement dangereuses, tandis que les sondes non radioactives ne sont pas dangereuses.
De plus, une autre différence entre les sondes radioactives et non radioactives réside dans leurs inconvénients. Les demi-vies courtes et les dangers associés à leur production, leur utilisation et leur élimination sont les inconvénients de l'utilisation de sondes radioactives. D'autre part, les étapes impliquées dans l'hybridation de l'ADN avec des sondes non radioactives sont généralement fastidieuses et chronophages.
L'infographie ci-dessous montre plus de comparaisons liées à la différence entre les sondes radioactives et non radioactives.
Résumé - Sondes radioactives vs non radioactives
Une sonde est un fragment d'ADN ou d'ARN qui contient une séquence nucléotidique complémentaire de la séquence d'intérêt. Afin de détecter la séquence cible, les sondes peuvent être marquées de manière radioactive, fluorescente ou chimique. Les sondes se lient aux séquences complémentaires de l'échantillon. Les sondes radioactives sont marquées avec des isotopes radioactifs tandis que les sondes non radioactives sont marquées avec de la biotine, de la digoxigénine ou de la peroxydase de raifort. C'est donc la principale différence entre les sondes radioactives et non radioactives.
