Différence clé - Nitrocellulose vs PVDF
Le Western blot est une méthode qui permet la détection et la quantification de protéines spécifiques à partir d'un échantillon de protéines. La fiabilité de la technique dépend de la sélection d'une membrane correcte pour l'absorption des protéines du gel. Il existe différents types de membranes microporeuses. Les membranes de nitrocellulose et de PVDF sont deux de ces membranes préférées par les chercheurs en raison de leurs attributs particuliers par rapport aux autres types de membranes. La sélection entre la nitrocellulose ou le PVDF est également un autre défi dans le Western Blot. La nitrocellulose et le PVDF ont une grande capacité d'absorption des protéines.le différence clé entre la nitrocellulose et la membrane PVDF est que les membranes de nitrocellulose n'ont pas la capacité d'éliminer les anticorps et de réutiliser la membrane pour la réanalyse des anticorps, tandis que les membranes PVDF ont une capacité d'élimination et de réutilisation.
Qu'est-ce que la nitrocellulose ?
La nitrocellulose est un polymère fabriqué en traitant la cellulose avec de l'acide nitrique et est utilisée pour fabriquer des membranes microporeuses en biologie moléculaire, en particulier pour les techniques de transfert telles que les transferts Southern, Northern et Western. La taille des pores des membranes de nitrocellulose varie de 3 à 20 µm. Les membranes microporeuses de nitrocellulose facilitent la détection des réactions immunochimiques se produisant à la surface de la membrane. Par conséquent, les membranes de nitrocellulose sont fréquemment utilisées pour l'immobilisation des protéines et la détection de protéines spécifiques dans le Western Blot. Les membranes de nitrocellulose peuvent également immobiliser les glycoprotéines et les acides nucléiques.
Les membranes de nitrocellulose sont préférées dans les dosages à flux latéral en raison de plusieurs caractéristiques. Les membranes de nitrocellulose absorbent les protéines à haute concentration. Le solvant utilisé pour mouiller la membrane ne diminue pas l'absorption des protéines de la membrane de nitrocellulose. Les membranes de nitrocellulose peuvent être facilement coupées à la taille de gel souhaitée et transférer les protéines du gel à la membrane par transfert électrique ou capillaire. La nitrocellulose permet un flux plus rapide des protéines à travers la membrane avec un potentiel de liaison élevé. La nitrocellulose montre une meilleure résistance à la manipulation. Une autre caractéristique particulière de la membrane de nitrocellulose est qu'elle peut être facilement collée avec des adhésifs résistants à l'eau sans solvant sur divers supports en plastique.
Figure 01: Membrane de nitrocellulose pour western blotting
Qu'est-ce que le PVDF ?
Le difluorure de polyvinylidène (PVDF) est un fluoropolymère produit par la polymérisation du difluorure de vinylidène et possède une capacité élevée d'immobilisation des protéines. Par conséquent, les membranes microporeuses en PVDF sont utilisées dans les techniques de transfert Western pour analyser des protéines spécifiques à partir de mélanges de protéines. Les membranes PVDF peuvent également être utilisées pour l'analyse des acides aminés et le séquençage des protéines. La caractéristique la plus importante de la membrane PVDF sur la membrane de nitrocellulose est qu'elle peut être facilement retirée des anticorps et réutilisée pour les sondes d'anticorps ultérieures.
Les membranes en PVDF sont plus épaisses que les membranes en nitrocellulose; par conséquent, plus résistant aux dommages lors de la réutilisation. Les membranes PVDF sont hautement hydrophobes. Par conséquent, ils doivent être trempés dans du méthanol ou de l'isopropanol avant utilisation.
Quelle est la différence entre la nitrocellulose et le PVDF ?
Nitrocellulose vs PVDF |
|
| La nitrocellulose est un polymère composé de cellulose. | PVDF est un fluoropolymère produit par la polymérisation du difluorure de vinylidène. |
| Taille des pores de la membrane | |
| Les tailles de pores typiques sont de 0,1, 0,2 ou 0,45μ | Les tailles de pores typiques sont de 0,1, 0,2 ou 0,45 μm |
| Capacité de liaison aux protéines | |
| La nitrocellulose a une capacité de liaison aux protéines de 80 à 100 μg/cm2. | PVDF a une capacité de liaison aux protéines de 170 à 200 μg/cm2. |
| Sensibilité | |
| Il a une faible sensibilité par rapport au PVDF. | Ceci a une haute sensibilité. |
| Détection des protéines faiblement exprimées | |
| Étant donné que la sensibilité est faible dans les membranes de nitrocellulose, elles ne conviennent pas à la détection de protéines faiblement exprimées. | Ceci est plus adapté à la détection des protéines faiblement exprimées en raison de sa sensibilité élevée. |
| Bruit de fond | |
| Cela a moins de bruit de fond | Cela a un bruit de fond plus élevé. |
| Interactions avec les protéines | |
| Les molécules de protéines se lient aux membranes de nitrocellulose par le biais d'interactions hydrophobes. | Les protéines se lient aux membranes PVDF par des interactions hydrophobes et dipolaires. |
| Nature de la membrane | |
| La nitrocellulose est cassante et fragile. Cependant, des versions en nitrocellulose sont disponibles et elles sont résistantes. | PVDF est plus durable et a une plus grande résistance chimique. |
| Capacité à dépouiller et à réutiliser | |
| La nitrocellulose peut avoir des difficultés à se dénuder et à refaire un test sans perdre le signal. | PVDF est idéal pour les applications de reprobing et de séquençage. |
| Performance | |
| La nitrocellulose est idéale pour détecter les protéines de faible poids moléculaire. | PVDF est plus adapté à la détection de protéines de poids moléculaire plus élevé. |
| Autres utilisations | |
| La nitrocellulose peut être utilisée pour l'analyse des acides nucléiques et le dot/slot blot. | PVDF peut être utilisé pour le séquençage des protéines et les systèmes de dosage en phase solide. |
| Coût | |
| C'est moins cher que les membranes PVDF. | C'est plus cher que les membranes de nitrocellulose. |
| Besoin de pré-mouillage | |
| Les membranes de nitrocellulose ne nécessitent pas de prétrempage avec du méthanol | Les membranes PVDF nécessitent un prétrempage avec du méthanol. |
Résumé – Nitrocellulose vs PVDF
Les membranes de nitrocellulose ont été les premières membranes utilisées commercialement pour les essais à flux latéral. Ils ont une grande capacité d'absorption des protéines. Par conséquent, les membranes de nitrocellulose sont utilisées dans le Western Blot. Le PVDF est un autre type de membrane utilisé dans le western blot et il a également une capacité d'absorption élevée des protéines. Les deux types sont utilisés dans le western blot pour l'analyse des protéines. Cependant, les membranes PVDF ont des attributs plus particuliers, ce qui les rend plus appropriées que les membranes de nitrocellulose pour le Western Blot. Mais, les membranes de nitrocellulose sont plus adaptées à la détection des protéines de faible poids moléculaire, les membranes de PVDF sont plus adaptées à la détection des protéines de haut poids moléculaire. C'est la différence entre les membranes en nitrocellulose et en PVDF.
