La principale différence entre la chromatofocalisation et la focalisation isoélectrique est que la chromatofocalisation est un type de méthode de chromatographie sur colonne qui utilise des résines échangeuses d'ions, tandis que la focalisation isoélectrique est un type de technique d'électrophorèse qui utilise des gels à gradient de pH immobilisés.
La chromatofocalisation et la focalisation isoélectrique sont deux techniques qui séparent les protéines en fonction de leurs points isoélectriques. La focalisation chromato et la focalisation isoélectrique ont toutes deux un grand pouvoir de résolution. La focalisation chromatographique est une méthode de chromatographie sur colonne à haute résolution, tandis que la focalisation isoélectrique est une méthode de séparation électrophorétique. De plus, la chromatofocalisation n'utilise pas de champ électrique alors que la focalisation isoélectrique nécessite un champ électrique.
Qu'est-ce que la focalisation chromatique ?
La chromatofocalisation est un type de chromatographie à haute élution qui sépare les protéines en fonction des différences de leur point isoélectrique. Il utilise une colonne de résine échangeuse d'ions et un gradient de pH développé en interne. Contrairement à la focalisation isoélectrique, la chromatofocalisation n'implique pas de champ électrique. La chromatofocalisation est une technique de purification puissante qui peut résoudre des molécules très similaires même ne différant que de 0,02 unités de pH. Par conséquent, la chromatofocalisation convient mieux comme étape de polissage final lorsqu'une haute résolution est requise pour séparer des composants très similaires.
En chromatofocalisation, l'échantillon est appliqué à la colonne en le mélangeant avec le tampon de départ. Les protéines dont le pH est supérieur à leur point isoélectrique sont chargées négativement et restent près du sommet de la colonne tandis que les autres protéines dont le pH est inférieur à leur point isoélectrique migrent vers le bas de la colonne. La protéine avec le point isoélectrique le plus élevé est éluée en premier tandis que la protéine avec le point isoélectrique le plus bas est éluée en dernier de la colonne. Cette technique est affectée par plusieurs facteurs tels que la précipitation des protéines et la linéarité du gradient de pH.
Qu'est-ce que la focalisation isoélectrique ?
La focalisation isoélectrique est une technique qui sépare différentes molécules en fonction de leur point isoélectrique. Elle est également connue sous le nom d'électrofocalisation. Cette technique est souvent utilisée pour la séparation des protéines dans un gel. Dans la focalisation isoélectrique, l'échantillon est ajouté dans des gels à gradient de pH immobilisé (IPG). Le gel IPG est une matrice de gel d'acrylamide copolymérisée avec un gradient de pH. Les protéines migrent vers la cathode jusqu'à ce qu'elles trouvent la région pH de leurs points isoélectriques. Lorsqu'une protéine atteint le pH qui n'a pas de charge nette, la migration cesse et donne une bande stationnaire. De même, chaque protéine donne une bande en un point du gradient de pH correspondant à son point isoélectrique.
Figure 01: Mise au point isoélectrique
La focalisation isoélectrique est la première étape de l'électrophorèse bidimensionnelle sur gel. Dans cette technique, les protéines sont d'abord séparées en fonction de leurs points isoélectriques par focalisation isoélectrique, puis séparées en fonction de leur poids moléculaire par SDS-PAGE.
Quelles sont les similitudes entre la focalisation chromato et la focalisation isoélectrique ?
- La focalisation chromato et la focalisation isoélectrique sont deux méthodes à haute résolution.
- Les deux sont basés sur le point isoélectrique des protéines.
- Ces techniques utilisent un gradient de pH.
- Les deux procédures sont informatives pour la caractérisation des variantes de l'hémoglobine humaine.
- Ils peuvent résoudre des molécules où les valeurs de pI diffèrent d'aussi peu que 0,02 unités de pH.
Quelle est la différence entre la focalisation chromato et la focalisation isoélectrique ?
Chromatofocusing est une technique de chromatographie sur colonne à haute résolution qui sépare les protéines en fonction de leur point isoélectrique. En revanche, la focalisation isoélectrique est une technique électrophorétique qui sépare les protéines selon leur point isoélectrique par l'application d'un champ électrique le long d'un gradient de pH formé dans un capillaire. C'est donc la principale différence entre la focalisation chromato et la focalisation isoélectrique.
Une autre différence entre la chromatofocalisation et la focalisation isoélectrique est que la chromatofocalisation n'implique pas de champ électrique alors que la focalisation isoélectrique nécessite un champ électrique.
Résumé - Chromatofocusing vs Isoelectric Focusing
La chromatofocalisation et la focalisation isoélectrique sont deux techniques similaires qui ont une grande capacité de résolution des molécules, en particulier des molécules très similaires. La chromatofocalisation est une technique de chromatographie sur colonne à haute résolution, tandis que la focalisation isoélectrique est une méthode d'électrophorèse. La chromatofocalisation n'implique pas de champ électrique, contrairement à la focalisation isoélectrique. Ainsi, cela résume la différence entre la focalisation chromato et la focalisation isoélectrique.
