La principale différence entre la filtration sur gel et la chromatographie d'affinité est que la chromatographie de filtration sur gel dépend des différences de poids moléculaire ou de taille de l'échantillon d'analyte, tandis que la chromatographie d'affinité dépend de l'affinité d'un analyte pour un ligand immobilisé.
Le terme chromatographie en chimie analytique fait référence au processus de séparation des composants d'un mélange à l'aide de différentes techniques. La chromatographie est un nom collectif qui représente un nombre variable de différentes méthodes de séparation.
Qu'est-ce que la chromatographie par filtration sur gel ?
La chromatographie par filtration sur gel est une technique analytique dans laquelle la séparation des composants dépend de la différence de poids moléculaire ou de taille. Cette technique est également connue sous le nom de chromatographie d'exclusion stérique ou chromatographie sur tamis moléculaire. La technique de séparation dans ce processus dépend de la capacité différente des molécules de l'échantillon à pénétrer dans les pores du milieu de filtration sur gel.
Dans la technique de filtration sur gel, la phase stationnaire contient des billes de matériau hydraté semblable à une éponge ayant des pores de dimensions moléculaires contenant une gamme étroite de tailles. Si l'on fait passer une solution aqueuse constituée de molécules de différentes tailles à travers une colonne contenant ces « tamis moléculaires », les molécules plus grosses que les pores du milieu de filtration se déplacent rapidement dans la colonne. En revanche, les plus petites molécules pénètrent dans les pores du gel et ont tendance à se déplacer lentement à travers la colonne. Les molécules éluent de la colonne par ordre décroissant de taille moléculaire. Ici, la limite d'exclusion du gel est la masse moléculaire des plus petites molécules incapables de pénétrer dans les pores d'un gel donné.
Il existe différents types de techniques de filtration sur gel, telles que la méthode de filtration indirecte sur gel, la filtration sur gel à l'état d'équilibre, la dialyse sur billes de gel, etc. La chromatographie indirecte par filtration sur gel est utile pour la détermination des hormones thyroïdiennes libres. La chromatographie de filtration sur gel à l'état d'équilibre est une technique indirecte utile principalement pour la mesure des stéroïdes libres comme le cortisol, la testostérone, etc. La dialyse aux billes de gel, en revanche, est une modification de la filtration sur gel à l'état d'équilibre qui est comparativement plus simple.
Qu'est-ce que la chromatographie d'affinité ?
La chromatographie d'affinité est une technique analytique et une méthode de séparation qui dépend d'une interaction de liaison spécifique entre un ligand immobilisé et son partenaire de liaison. Certains exemples comprennent la liaison anticorps-antigène, la liaison enzyme-substrat et la liaison enzyme-inhibiteur. Par conséquent, cette technique a de nombreuses applications importantes dans la purification des acides nucléiques, la purification des protéines à partir d'extraits cellulaires et la purification à partir du sang.
Dans cette technique, la propriété la plus importante est l'immobilisation du ligand. Nous pouvons utiliser divers matériaux tels que les acrylates et le gel de silice pour cela. Il est important d'empêcher l'interférence stérique de la molécule cible avec le ligand. De plus, un inhibiteur est fixé à la phase solide. Nous appelons cet inhibiteur un espaceur. Classiquement, un espaceur est constitué d'une chaîne hydrocarbonée.
La phase stationnaire de la chromatographie d'affinité contient le noyau, l'espaceur et le ligand. Parfois, il possède également un ion métallique couplé au ligand. La phase solide la plus préférée pour la phase stationnaire dans cette technique est le gel d'agarose car il est facilement distribué pour remplir et remplir la colonne avec des lits de résine de n'importe quelle taille, et il est suffisamment grand pour que les biomolécules s'écoulent librement dans et à travers les perles. Les ligands peuvent se fixer de manière covalente au polymère en billes de diverses manières. Les composés espaceurs les plus courants sont le bromure de cyanogène, l'époxyde, l'époxyde avec de l'acide C6 et la diamine. D'autre part, le ligand que nous pouvons utiliser diffère selon la cible, par exemple, anticorps-antigène, ions fer ou aluminium-phosphoprotéines, avidine-biotine, glutathion-GST, protéines chélatrices-His, etc.
Quelle est la différence entre la filtration sur gel et la chromatographie d'affinité ?
La chromatographie est une technique analytique importante. La chromatographie par filtration sur gel et la chromatographie d'affinité sont deux variantes importantes de la chromatographie. le différence clé entre la filtration sur gel et la chromatographie d'affinité est que la chromatographie par filtration sur gel dépend des différences de poids moléculaire ou de taille de l'échantillon d'analyte, tandis que la chromatographie d'affinité dépend de l'affinité d'un analyte pour un ligand immobilisé.
Résumé - Filtration sur gel vs chromatographie d'affinité
Il existe différents types de techniques chromatographiques en fonction de leur application et de la nature de l'échantillon d'analyte. La filtration sur gel et la chromatographie d'affinité sont deux de ces types de techniques. La principale différence entre la filtration sur gel et la chromatographie d'affinité est que la chromatographie de filtration sur gel dépend des différences de poids moléculaire ou de taille de l'échantillon d'analyte, tandis que la chromatographie d'affinité dépend de l'affinité d'un analyte pour un ligand immobilisé.
