La principale différence entre la chromatographie d'affinité et la chromatographie par échange d'ions est que nous pouvons utiliser la chromatographie d'affinité pour séparer les composants chargés ou non chargés dans un mélange, tandis que nous pouvons utiliser la chromatographie par échange d'ions pour séparer les composants chargés dans un mélange.
La chromatographie est une technique que nous pouvons utiliser pour séparer les composants souhaités dans un mélange. Il existe différents types tels que la chromatographie liquide, la chromatographie en phase gazeuse, etc. La chromatographie d'affinité et la chromatographie échangeuse d'ions sont deux sous-catégories de la chromatographie liquide. Aussi, dans ces techniques, il y a deux phases. A savoir, ce sont la phase stationnaire et la phase mobile. Le but de ces techniques est de séparer les composants, en fonction de la liaison des composants, de la phase mobile à la surface de la phase stationnaire.
Qu'est-ce que la chromatographie d'affinité ?
La chromatographie d'affinité est une technique biochimique que nous utilisons pour séparer les composants d'un mélange en fonction des interactions entre ces composants.
Les interactions que nous utilisons dans ce cas sont les suivantes:
- Interactions antigène-anticorps
- Interactions enzyme-substrat
- Interactions récepteur-ligand
- Interactions protéines-acides nucléiques
Dans cette technique, nous utilisons les propriétés moléculaires des molécules pour cette technique de séparation. Ici, nous permettons au composé souhaité d'interagir avec une phase stationnaire via une liaison hydrogène, une interaction ionique, des ponts disulfure, une interaction hydrophobe, etc. Les molécules qui n'interagissent pas avec la phase stationnaire élueront en premier. Ainsi, nous pouvons le séparer du mélange. Le composé souhaité restera attaché à la phase stationnaire. Par conséquent, nous pouvons le détacher à l'aide d'un solvant d'élution et le faire éluer pour le séparer également.
Figure 01: Une colonne chromatographique
La chromatographie d'affinité est utile pour purifier et concentrer une substance à partir d'un mélange à l'aide d'une solution tampon. En outre, il est utile de réduire les substances indésirables dans un mélange. Lors de l'examen de l'appareil que nous utilisons pour ce processus, nous devrions utiliser une colonne remplie de notre phase stationnaire. Ensuite, il faut charger la phase mobile qui contient les biomolécules que l'on va séparer. Ensuite, laissez-les se lier à la phase stationnaire. Ensuite, en utilisant un tampon de lavage, nous pouvons séparer les biomolécules non cibles, mais les molécules cibles doivent avoir une haute affinité pour la phase stationnaire afin de réussir le processus de séparation.
Qu'est-ce que la chromatographie par échange d'ions ?
La chromatographie ionique est une forme de chromatographie liquide dans laquelle nous pouvons analyser des substances ioniques. Souvent, nous l'utilisons pour analyser les anions et cations inorganiques (c'est-à-dire les anions chlorure et nitrate et les cations potassium, sodium). Bien que ce soit moins courant, nous pouvons également analyser les ions organiques. De plus, nous pouvons utiliser cette technique pour la purification des protéines car les protéines sont des molécules chargées à certaines valeurs de pH. Ici, nous utilisons une phase stationnaire solide à laquelle les particules chargées peuvent se fixer. Par exemple, nous pouvons utiliser les copolymères de résine polystyrène-divinylbenzène comme support solide.
Figure 02: Phases de la chromatographie par échange d'ions
Pour expliquer cela plus en détail, la phase stationnaire contient des ions fixes tels que des anions sulfate ou des cations amine quaternaire. Chacun de ces éléments doit être associé à un contre-ion (un ion de charge opposée), si nous voulons maintenir la neutralité de ce système. Ici, si le contre-ion est un cation, alors nous appelons le système une résine échangeuse de cations. Mais, si le contre-ion est un anion, le système est une résine échangeuse d'anions.
Il y a cinq phases principales dans un processus d'échange d'ions;
- Étape initiale
- Adsorption de la cible
- Démarrage de l'élution
- Fin d'élution
- Régénération
Quelle est la différence entre la chromatographie d'affinité et la chromatographie par échange d'ions ?
La chromatographie d'affinité est une technique biochimique que nous utilisons pour séparer les composants d'un mélange en fonction des interactions entre ces composants, tandis que la chromatographie ionique est une forme de chromatographie liquide dans laquelle nous pouvons analyser des substances ioniques. Par conséquent, la principale différence entre la chromatographie par affinité et la chromatographie par échange d'ions est que nous ne pouvons utiliser la chromatographie par échange d'ions que pour la séparation de substances ioniques, tandis que la chromatographie par affinité est capable de séparer les particules chargées et non chargées.. Lorsque l'on considère le principe de fonctionnement, la différence entre la chromatographie d'affinité et d'échange d'ions est que la chromatographie d'affinité procède en raison du fait que les molécules cibles ont une affinité élevée pour la phase stationnaire. Cependant, pour la chromatographie par échange d'ions, les molécules cibles ont une charge opposée à celle de la surface de la phase stationnaire.
L'infographie ci-dessous présente la différence entre la chromatographie d'affinité et d'échange d'ions en comparaison côte à côte.
Résumé - Chromatographie d'affinité vs échange d'ions
En résumé, la chromatographie d'affinité et d'échange d'ions sont deux formes de techniques de chromatographie liquide. le différence clé entre la chromatographie d'affinité et d'échange d'ions est que nous pouvons utiliser la chromatographie d'affinité pour séparer les composants chargés ou non chargés dans un mélange tandis que nous pouvons utiliser la chromatographie d'échange d'ions pour séparer les composants chargés dans un mélange.
