La principale différence entre l'immunofluorescence directe et indirecte est que l'immunofluorescence directe utilise un seul anticorps qui agit contre la cible d'intérêt, tandis que l'immunofluorescence indirecte utilise deux anticorps pour marquer la cible d'intérêt.
L'immunofluorescence ou imagerie cellulaire est une technique utilisée pour marquer un antigène cible spécifique avec un fluorophore. Ici, le fluorophore est un composé chimique fluorescent qui peut réémettre de la lumière lors d'une excitation lumineuse. Lorsqu'un fluorophore se lie à l'antigène cible, il permet la détection de la molécule cible dans l'échantillon. Pour le décrire plus en détail, lorsqu'un antigène se lie à un anticorps spécifique, il peut être conjugué à des fluorophores. Par conséquent, il est facile de détecter la présence de l'antigène cible dans l'échantillon lors de l'observation au microscope à fluorescence.
De plus, il existe deux types d'immunofluorescence; immunofluorescence directe et indirecte. La différence entre l'immunofluorescence directe et indirecte réside principalement dans le nombre d'anticorps utilisés et la conjugaison du fluorophore. Autrement dit, en immunofluorescence directe, le fluorophore se conjugue directement à l'anticorps primaire tandis qu'en immunofluorescence indirecte, le fluorophore se conjugue à l'anticorps secondaire.
Qu'est-ce que l'immunofluorescence directe ?
L'immunofluorescence utilise des anticorps pour détecter des antigènes cibles spécifiques. L'immunofluorescence directe est l'un des deux types d'immunofluorescence. En immunofluorescence directe, un seul anticorps (anticorps primaire) est impliqué et le fluorophore se conjugue directement avec l'anticorps primaire. Lors de la liaison de l'anticorps avec l'antigène cible, le fluorophore émet une fluorescence qui peut être détectée par un microscope à fluorescence.
Figure 01: Immunofluorescence directe
Cependant, l'immunofluorescence directe est une méthode coûteuse car les anticorps conjugués primaires sont coûteux par rapport aux anticorps secondaires. Néanmoins, il n'implique pas d'étape supplémentaire donc, une technique plus courte. De plus, les liaisons non spécifiques sont réduites en immunofluorescence directe. Par conséquent, la réactivité croisée des espèces est faible. Mais en détection, la sensibilité de l'immunofluorescence directe est faible par rapport à l'immunofluorescence indirecte.
Qu'est-ce que l'immunofluorescence indirecte ?
L'immunofluorescence indirecte est le deuxième type d'immunofluorescence qui implique deux types d'anticorps tels que les anticorps primaires et secondaires dans le marquage de l'antigène cible. Dans cette méthode, le fluorophore se conjugue avec l'anticorps secondaire. Par conséquent, cette technique implique une étape supplémentaire.
Figure 02: Immunofluorescence
Cependant, la sensibilité est élevée dans cette méthode car plusieurs fluorophores peuvent être conjugués à des anticorps secondaires et cela facilite la détection. De plus, l'immunofluorescence indirecte est moins coûteuse du fait que la conjugaison d'anticorps secondaires est moins coûteuse et plus facile. Par rapport à l'immunofluorescence directe, la réactivité croisée des espèces est élevée dans la méthode indirecte.
Quelles sont les similitudes entre l'immunofluorescence directe et indirecte ?
- Il existe deux types de techniques d'immunofluorescence.
- Les anticorps primaires et le fluorophore sont impliqués dans les deux méthodes.
- De plus, la réaction antigène-anticorps se produit dans les deux méthodes.
- De plus, l'immunofluorescence directe et indirecte utilise un microscope à fluorescence pour la détection de l'antigène.
Quelle est la différence entre l'immunofluorescence directe et indirecte ?
L'immunofluorescence peut être directe ou indirecte en fonction de la conjugaison du fluorophore avec les anticorps utilisés. En immunofluorescence directe, le fluorophore se conjugue avec l'anticorps primaire, qui est le seul anticorps impliqué dans cette technique. Contrairement à cela, en immunofluorescence indirecte, le fluorophore se conjugue avec l'anticorps secondaire, qui est l'un des deux types d'anticorps impliqués dans la technique. Par conséquent, la principale différence entre l'immunofluorescence directe et indirecte est le type d'anticorps qui se conjugue avec le fluorophore.
L'infographie suivante fournit une comparaison côte à côte de la différence entre l'immunofluorescence directe et indirecte.
Résumé - Immunofluorescence directe vs indirecte
L'immunofluorescence est une technique utilisée pour détecter la présence d'antigènes spécifiques dans un échantillon. Cette technique utilise des anticorps spécifiques. Par conséquent, dans celui-ci, les anticorps se conjuguent avec des fluorophores pour les détecter à l'aide d'un microscope à fluorescence. De plus, il existe deux types d'immunofluorescence, à savoir l'immunofluorescence directe et indirecte. L'immunofluorescence directe implique un seul anticorps et un fluorophore directement conjugué à cet anticorps. L'immunofluorescence indirecte implique deux anticorps; primaire et secondaire et fluorophore conjugué à l'anticorps secondaire. Étant donné que plusieurs anticorps secondaires peuvent se lier à un anticorps primaire et que plusieurs fluorophores peuvent se conjuguer à des anticorps secondaires, l'immunofluorescence indirecte est une méthode plus sensible que la méthode directe. De plus, la méthode indirecte est moins coûteuse que la méthode directe. C'est donc la différence entre l'immunofluorescence directe et indirecte.
