Différence clé - Page SDS vs Page native
SDS et page native sont deux types de techniques d'électrophorèse sur gel de polyacrylamide utilisées en biologie moléculaire. La principale différence entre la page SDS et la page native est le type de gel de polyacrylamide utilisé. Dans la page SDS, un gel dénaturant est utilisé, les molécules sont donc séparées en fonction de leur poids moléculaire. En revanche, dans Native Page, des gels non dénaturants sont utilisés. Par conséquent, les molécules sont séparées en fonction de leur taille, de leur charge et de leur forme.
L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide (page) utilise un gel fabriqué en polymérisant des monomères d'acrylamide avec du méthylène bisacrylamide. Le polyacrylamide est plus résistant et plus stable à la chaleur que l'agarose. Les gels de polyacrylamide ont une taille de pores plus petite qui permet une séparation efficace des protéines. Il existe deux principaux types de configurations de page, à savoir la page SDS et la page native. L'électrophorèse sur gel SDS Page ou Sodium-Dodecyl Sulfate Polyacrylamide sépare les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Les gels dénaturants sont utilisés dans la page FDS. Native Page utilise des gels non dénaturants et sépare les protéines en fonction de leur taille, de leur charge et de leur forme (conformation 3D).
Qu'est-ce que la page SDS ?
SDS Page est la technique électrophorétique la plus couramment utilisée pour séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Le gel est fabriqué en ajoutant du SDS (Sodium dodecyl sulfate), qui est un détergent. Le SDS transforme les protéines en monomères. Le SDS est un détergent anionique. Par conséquent, il ajoute une charge négative nette aux protéines dans une large plage de pH. Lorsque la charge négative nette est transmise aux molécules de protéines, en raison de la variation de charge, les structures complexes sont décomposées. En raison de la charge négative, les protéines s'attirent vers l'extrémité positive. Ainsi, les molécules de poids moléculaire plus faible se déplacent plus rapidement sur la matrice de gel et peuvent être observées près de l'anode, tandis que les protéines de poids moléculaire plus élevé sont observées plus près des puits.
Figure 01: Page FDS
La liaison du SDS à la chaîne polypeptidique est proportionnelle à sa masse moléculaire relative. Par conséquent, la masse moléculaire peut également être déterminée via la page SDS. La coloration des gels SDS Page se fait par coloration au bleu de bromophénol. Les applications de la page SDS vont dans une plus large mesure où elle peut être utilisée pour estimer la masse moléculaire relative et pour déterminer l'abondance relative des protéines dans un mélange de protéines. La page SDS peut également être utilisée pour déterminer la distribution des protéines dans un mélange de protéines. La page SDS est également appliquée pour purifier et évaluer les protéines. Il est utilisé comme procédure préliminaire pour le Western Blot et l'hybridation, qui à leur tour sont utilisés pour la cartographie et l'identification des protéines.
Qu'est-ce qu'une page native ?
L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide natif (page native) utilise un gel non dénaturant. Par conséquent, le SDS ou tout autre agent dénaturant n'est pas ajouté à la matrice de gel. Dans Native Page, la séparation des protéines est basée sur la charge et la taille de la protéine. Par conséquent, la mobilité de la protéine dépend de la charge et de la taille de la protéine.
La charge de la protéine dépend des chaînes latérales des acides aminés. Si les chaînes latérales sont chargées négativement, la protéine recevra une charge globale négative et vice versa. Les protéines conservent une conformation 3D en raison du repliement qui a lieu. Le repliement résulte de plusieurs types de liaisons dans les protéines telles que les liaisons disulfure, les interactions hydrophobes et les liaisons hydrogène. Par conséquent, si la Page native est portée à un pH neutre, les protéines seront séparées en fonction de la forme moléculaire de la protéine. Par conséquent, Native Page peut être utilisé comme une technique sensible pour détecter le changement de charge ou de conformation de la protéine.
Le principal avantage de la Page native est que la protéine utilisée pour l'analyse de la Page peut être récupérée dans son état d'origine après l'analyse de la Page, car la protéine n'est pas perturbée pendant le processus. Native Page est une technique à débit relativement élevé, et la stabilité de la protéine est augmentée.
Figure 02: Page native
À la fin de l'analyse du gel, le gel Native Page peut être visualisé par coloration avec du bleu de bromophénol ou tout autre réactif de coloration approprié. Les applications de Native Page incluent la séparation des protéines acides, y compris les glycoprotéines telles que l'érythropoïétine recombinante humaine ou l'identification des protéines présentes dans l'albumine sérique bovine (BSA).
Quelles sont les similitudes entre la page SDS et la page native ?
- Les systèmes SDS Page et Native Page utilisent du gel de polyacrylamide comme matrice du gel.
- Les deux sont utilisés pour la séparation et l'identification des protéines.
- Les deux utilisent la mobilité électrophorétique pour séparer les composés.
- Les deux peuvent être effectués de manière verticale ou horizontale (principalement en tant que configurations de page verticales car la longueur de la course est plus longue).
- L'appareil d'électrophorèse comprenant le réservoir de gel, les peignes, l'alimentation électrique est nécessaire au fonctionnement des deux techniques.
- La visualisation du gel peut se faire par des méthodes de coloration dans les deux techniques.
Quelle est la différence entre la page SDS et la page native ?
Page SDS vs Page native |
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| SDS Page ou Sodium-dodecyl sulfate Page sépare les protéines en fonction de leur poids moléculaire et utilise un gel dénaturant. | Native Page utilise des gels non dénaturants et sépare les protéines en fonction de leur taille, de leur charge et de leur forme (conformation 3D). |
| Type de gel | |
| Un gel dénaturant est utilisé dans la page FDS. | Un gel non dénaturant est utilisé dans la page native. |
| Présence de SDS | |
| SDS est présent en tant que détergent pour conférer une charge négative à l'échantillon dans la page SDS. | SDS n'est pas présent dans la page native. |
| Base de séparation | |
| La séparation des protéines dépend du poids moléculaire de la protéine sur la page FDS. | La séparation dépend de la taille et de la forme de la molécule de protéine dans la page native. |
| Stabilité de la protéine | |
| La stabilité de la protéine est faible dans la page FDS. | La stabilité des protéines est élevée dans la page native. |
| Récupération de la protéine d'origine | |
| Pas possible car il est dénaturé dans la page FDS. | Possible sur la page native. |
Résumé – Page SDS vs Page native
SDS Page et Native Page sont deux types de techniques d'électrophorèse sur gel de polyacrylamide utilisées pour séparer les protéines. La page SDS est traitée avec un détergent appelé SDS. Le SDS confère une charge négative globale à la protéine, ce qui entraîne alors la dénaturation de la protéine. Par conséquent, les protéines sont séparées en fonction de leur poids moléculaire. En revanche, la technique Native Page n'utilise aucun agent dénaturant. Ainsi, les protéines sont soit séparées en fonction de leur taille, soit de leur forme. C'est la différence entre la page SDS et la page native.
