Différence clé - Page SDS vs Western Blot
Le Western blot est une technique qui détecte une protéine spécifique à partir d'un échantillon de protéines. Cette technique est réalisée en plusieurs étapes clés: électrophorèse sur gel, transfert et hybridation. L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide dodécylsulfate de sodium (page SDS) est une sorte de technique d'électrophorèse sur gel qui est utilisée pour séparer les protéines en fonction de leur taille (poids moléculaires). Western blot est une feuille spéciale d'une membrane de transfert qui est utilisée pour transférer le même motif de protéines dans la page SDS. le différence clé entre SDS Page et western blot est que SDS Page permet la séparation des protéines dans un mélange tandis que western blot permet la détection et la quantification d'une protéine spécifique à partir d'un mélange. Les deux sont utiles dans les études d'analyse des protéines.
Qu'est-ce que la page SDS ?
SDS Page est une technique d'électrophorèse sur gel utilisée pour la séparation des protéines. Il est couramment utilisé en biochimie, en génétique, en médecine légale et en biologie moléculaire. Une fois les protéines extraites de l'échantillon, elles sont passées sur un gel composé de SDS et de polyacrylamide. Le SDS est un détergent anionique qui est utilisé pour linéariser les protéines (dénaturer les protéines) et pour conférer une charge négative aux protéines linéarisées proportionnelle à leur masse moléculaire. Le polyacrylamide devient le support solide du gel. Les protéines dénaturées qui sont chargées négativement migrent vers l'extrémité positive de l'appareil à travers le gel. Selon la taille des protéines, les vitesses de migration diffèrent d'une protéine à l'autre et une séparation se produit. Par conséquent, la page SDS est utile pour la séparation des protéines individuelles en fonction de leur taille.
La préparation du gel de polyacrylamide pour le fractionnement des protéines est une étape cruciale dans SDS Page. La concentration correcte de polyacrylamide et le type d'agent de réticulation utilisé affectent fortement les propriétés physiques du gel, ce qui rend la séparation réelle des différentes protéines. La taille des pores du gel doit être correctement gérée pour une séparation efficace. Cependant, la page SDS est considérée comme une technique de séparation des protéines à haute résolution.
La technique de la page SDS présente une limitation majeure dans l'analyse des protéines. Étant donné que le SDS dénature les protéines avant la séparation, il ne permet pas la détection de l'activité enzymatique, des interactions de liaison aux protéines, des cofacteurs protéiques, etc.
Figure 01: Page FDS
Qu'est-ce que le transfert Western ?
La technique de transfert Western permet la détection d'une protéine spécifique à partir d'un mélange de protéines et la mesure de la quantité et du poids moléculaire de la protéine. Western blot est la membrane utilisée pendant la procédure de transfert pour obtenir l'image miroir des modèles de protéines dans le gel SDS-polyacrylamide. La membrane utilisée pour le Western Blot est principalement composée de nitrocellulose ou de difluorure de polyvinylidène (PVDF). La membrane avec la protéine transférée peut être utilisée pour identifier la protéine souhaitée. Il nécessite un anticorps de haute qualité pour la détection de la protéine souhaitée par hybridation. L'anticorps se lie à son antigène spécifique et révèle la présence de l'antigène recherché qui est une protéine.
Le transfert des protéines du gel de polyacrylamide SDS vers le western blot est réalisé par électroblot. C'est une méthode efficace et rapide qui provoque l'électrophorèse des protéines hors du gel et leur passage sur la membrane de nitrocellulose (western blot).
Figure 02: Western Blot
Quelle est la différence entre SDS Page et Western Blot ?
SDS Page vs Western Blot |
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| SDS Page est une technique d'électrophorèse sur gel. | Western blot est une technique qui est réalisée sur une membrane pour détecter une protéine spécifique à partir d'un mélange. |
| Utiliser | |
| La page SDS permet de séparer les protéines en fonction de leur taille. | Western blot permet le transfert de protéines sur le gel de page SDS sans changer son motif et permet l'hybridation avec des anticorps spécifiques. |
| Inconvénients | |
| La dénaturation des protéines, le coût élevé et la présence de produits chimiques neurotoxiques sont les inconvénients de cette technique. | Cette technique est chronophage et nécessite une bonne expérience personnelle et des conditions contrôlées spécifiques. |
Résumé – Page SDS vs Western Blot
SDS page et western blot sont deux méthodes impliquées dans l'analyse des protéines. La page SDS permet une séparation facile des protéines sur un gel en fonction de leur poids moléculaire. Western blot aide à confirmer la présence et la quantité d'une protéine spécifique par hybridation avec des anticorps spécifiques. C'est la différence entre SDS Page et western blot.
