La principale différence entre le dosage colorimétrique et le dosage fluorométrique est que le dosage colorimétrique détermine la concentration de composés colorés dans une solution tandis que le dosage fluorométrique détermine le mécanisme cinétique d'une solution.
Un test biochimique est une technique qui détecte ou quantifie analytiquement l'activité d'une molécule ou d'une substance biologique. C'est un processus in vitro. Le dosage colorimétrique et le dosage fluorimétrique sont deux types de dosages biochimiques courants effectués en laboratoire. Plusieurs techniques telles que ELISA et Western Blot sont également des tests biochimiques complexes pour la quantification de l'activité métabolique et la mesure du comportement fonctionnel des biomolécules telles que les protéines, les enzymes et d'autres petites molécules. Ces types de tests sont utilisés pour l'identification des interactions protéine-ADN, protéine-ARN et protéine-protéine.
Qu'est-ce qu'un dosage colorimétrique ?
Un dosage colorimétrique est une technique qui détermine la concentration de composés colorés dans une solution. En d'autres termes, le dosage colorimétrique est une réaction qui conduit à un changement de couleur dû à une réaction enzymatique ou chimique entre des réactifs et des analytes. Les dosages colorimétriques sont pratiqués en biochimie pour tester des enzymes, des composés spécifiques, des hormones, des anticorps et d'autres analytes. Ils utilisent des colorimètres ou des spectrophotomètres. Les colorimètres sont des instruments qui caractérisent des échantillons colorés afin de fournir une mesure objective des caractéristiques de couleur. Un spectrophotomètre est un appareil qui mesure l'intensité lumineuse en fonction de la couleur ou de la longueur d'onde de la lumière.
Figure 01: Dosage colorimétrique
Comment fonctionne un dosage colorimétrique ?
Dans un essai colorimétrique, une plaque est préparée avec un anticorps particulier lié aux puits. Ensuite, l'échantillon est ajouté. Cela peut permettre à l'échantillon de se lier à l'anticorps. Ensuite, un anticorps de détection et un substrat sont ajoutés aux puits pour réagir avec la sonde de détection. La solution d'arrêt est ajoutée à la fin avant la lecture. Un puits vide appelé le blanc est laissé sans l'échantillon. Dans le test colorimétrique, plus la couleur est foncée, plus la concentration en analyte est élevée. Habituellement, une seule longueur d'onde est nécessaire pour effectuer la lecture. Mais s'il existe une mesure de référence, deux longueurs d'onde ou plus sont utilisées.
Qu'est-ce qu'un dosage fluorimétrique ?
Le dosage fluorimétrique est une technique qui détermine le mécanisme cinétique des réactions enzymatiques. Un dosage fluorométrique a lieu avec formation d'un produit fluorescent à partir d'un substrat non fluorescent ou vice versa. Ce test utilise également le transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET) où la réaction enzymatique modifie la position de deux fluorophores dans le substrat, modifiant ainsi l'intensité de la fluorescence.
Figure 02: Dosage fluorométrique
Les dosages fluorométriques sont généralement beaucoup plus sensibles que les autres dosages. Les estimations d'enzymes diagnostiques dans les échantillons de tissus, de cellules ou de fluides des patients augmentent en raison de sa sensibilité plus élevée.
Comment fonctionne un dosage fluorimétrique ?
Dans un test fluorométrique, un substrat est ajouté à l'échantillon dans la plaque et la réponse de fluorescence est prise à l'aide du lecteur de plaque. Ici, chaque cellule est mesurée séparément. Les plaques opaques sont utilisées dans les dosages fluorimétriques. Cela réduit la diffusion de la lumière. Deux longueurs d'onde sont nécessaires pour ce type de dosage. Une longueur d'onde sert à détecter l'excitation et l'autre à l'émission.
Quelles sont les similitudes entre les dosages colorimétriques et fluorométriques ?
- Le dosage colorimétrique et le dosage fluorimétrique sont deux types de dosages biochimiques.
- Les deux tests sont effectués à des fins de diagnostic médical.
- Ces tests impliquent une réaction enzymatique.
- Les deux tests impliquent un substrat et des analytes.
Quelle est la différence entre dosage colorimétrique et fluorométrique ?
Un dosage colorimétrique est une technique qui détermine la concentration de composés colorés dans une solution, tandis que le dosage fluorométrique est une technique qui détermine le mécanisme cinétique des réactions enzymatiques. C'est donc la principale différence entre les dosages colorimétriques et fluorométriques. De plus, les dosages fluorimétriques sont plus sensibles que les dosages colorimétriques; ainsi, les dosages fluorométriques ont la capacité de détecter plus d'analytes. Il s'agit donc d'une autre différence importante entre les dosages colorimétriques et fluorométriques. De plus, les dosages fluorométriques nécessitent deux longueurs d'onde, tandis que les dosages colorimétriques sont effectués avec une longueur d'onde.
L'infographie ci-dessous présente plus de différences entre les dosages colorimétriques et fluorométriques.
Résumé - Dosage colorimétrique vs fluorométrique
Un test biochimique est un processus analytique utilisé pour déterminer et quantifier les réactions métaboliques cellulaires. Le dosage colorimétrique et le dosage fluorométrique sont deux types de dosages biochimiques. Le dosage colorimétrique est une réaction qui conduit à un changement de couleur dû à une réaction enzymatique ou chimique entre des réactifs et des analytes, tandis que le dosage fluorométrique est une technique utilisée pour déterminer le mécanisme cinétique des réactions enzymatiques. Les deux tests dépendent d'une réaction enzymatique impliquant un substrat et un analyte. Les dosages fluorométriques sont plus sensibles que les dosages colorimétriques. Plus important encore, les dosages fluorométriques nécessitent deux longueurs d'onde, tandis que les dosages colorimétriques peuvent être effectués avec une seule longueur d'onde. Ainsi, cela résume la différence entre dosage colorimétrique et fluorométrique.
