La principale différence entre la HPLC RP et le HIC est que la HPLC RP utilise une phase mobile plus polaire et une phase stationnaire moins polaire. Alors que HIC utilise une phase stationnaire hydrophobe qui permet aux molécules hydrophobes de s'y attacher.
La chromatographie est une technique analytique qui aide à séparer un mélange en ses composants. Tout d'abord, nous devons dissoudre l'échantillon à séparer dans une solution. Ce mélange solution-substance est appelé la phase mobile. Ensuite, la phase mobile est passée à travers un autre matériau appelé la phase stationnaire. La phase stationnaire détermine la séparation des composants. La séparation se produit en raison du partage du matériau entre la phase mobile et la phase stationnaire.
Qu'est-ce que la HPLC RP ?
Le terme HPLC RP signifie chromatographie liquide haute performance en phase inverse. Cela implique la séparation des composants d'un mélange, en fonction de l'hydrophobicité. Les composants hydrophobes de la phase mobile se lient aux ligands hydrophobes immobilisés sur la phase stationnaire, tandis que les composants hydrophiles éluent à travers la phase stationnaire sans se fixer à la surface de la phase stationnaire.
Figure 01: Appareil HPLC
De plus, cette méthode a une meilleure reproductibilité par rapport aux autres techniques chromatographiques, et elle montre également une large applicabilité. Par conséquent, nous utilisons cette méthode dans les laboratoires pour plus de 75 % de toutes les méthodes HPLC. La plupart du temps, nous utilisons un mélange aqueux d'eau avec un solvant organique polaire miscible comme phase mobile. Ainsi, il assurera la fixation des composants hydrophobes de la solution à la surface de la phase stationnaire.
Qu'est-ce que le HIC ?
Le terme HIC signifie Hydrophobic Interaction Chromatography. Il s'agit d'un type de HPLC en phase inverse, et cette méthode est principalement utilisée pour la séparation de grandes biomolécules telles que les protéines. Dans cette méthode, nous devons utiliser un milieu aqueux pour fabriquer l'échantillon de la biomolécule. C'est parce que les solvants organiques peuvent provoquer la dénaturation des protéines. De plus, cette technique utilise l'interaction entre de grosses molécules avec une surface légèrement hydrophobe de la phase stationnaire. De plus, nous devons utiliser une forte concentration en sel dans l'échantillon car cela favorise la rétention de la protéine sur l'emballage; ce processus est appelé relargage. En diminuant progressivement la concentration en sel, nous pouvons faire éluer les biomolécules séparément en fonction de leur hydrophobicité.
Habituellement, cette méthode utilise les conditions opposées à celles de la chromatographie échangeuse d'ions. Dans cette technique, nous devons d'abord faire passer une solution tampon à travers la colonne afin de réduire la solvatation du soluté dans l'échantillon. Il rend les régions hydrophobes de la protéine à exposer. Cependant, lorsque la molécule est plus hydrophobe, moins de sel est nécessaire pour favoriser la liaison. Ici, les solutés les moins hydrophobes sont élués en premier, et selon le changement de concentration en sel, les solutés les plus hydrophobes sont élués en dernier.
Quelle est la différence entre RP HPLC et HIC ?
La chromatographie est une technique analytique de séparation des composants d'un mélange. RP HPLC et HIC sont deux techniques chromatographiques spécialisées. La principale différence entre RP HPLC et HIC est que RP HPLC utilise une phase mobile plus polaire et une phase stationnaire moins polaire, tandis que HIC utilise une phase stationnaire hydrophobe, qui permet aux molécules hydrophobes de s'y fixer.
L'infographie ci-dessous résume la différence entre RP HPLC et HIC.
Résumé - RP HPLC vs. HIC
La chromatographie est une technique analytique de séparation des composants d'un mélange. RP HPLC et HIC sont deux techniques chromatographiques spécialisées. La principale différence entre la RP HPLC et le HIC est que la RP HPLC utilise une phase mobile plus polaire et une phase stationnaire moins polaire, tandis que le HIC utilise une phase stationnaire hydrophobe, qui permet aux molécules hydrophobes de s'y fixer.
