La principale différence entre la FPLC et la HPLC est que la FPLC est un type de chromatographie liquide qui purifie les grandes biomolécules telles que les protéines, les nucléotides et les peptides, tandis que la HPLC est un type de chromatographie liquide qui sépare les composés de faible poids moléculaire.
La chromatographie liquide est une technique utilisée pour séparer un échantillon en ses composants individuels. Cette séparation se produit en raison de l'interaction d'échantillons spécifiques avec des phases mobiles et stationnaires. Les composants d'un échantillon sont séparés en fonction de l'affinité de chaque composant pour la phase mobile en chromatographie liquide. Lorsque la phase mobile et l'échantillon traversent une colonne, les composants de l'échantillon commencent à se séparer en bandes qui peuvent être détectées par spectroscopie UV-VIS. Par conséquent, FPLC et HPLC sont deux types de techniques de chromatographie liquide.
Qu'est-ce que le FPLC ?
FPLC est un type de chromatographie liquide qui purifie de grosses biomolécules telles que les protéines, les nucléotides et les peptides. La chromatographie liquide rapide sur protéines (FPLC) a été développée et commercialisée pour la première fois en Suède par la société Pharmacia en 1982. Elle est souvent utilisée pour analyser ou purifier des mélanges de protéines. Ceci se déroule sur la base du principe des affinités des composants de l'échantillon pour un fluide en mouvement (phase mobile) et un matériau solide poreux (phase stationnaire). En FPLC, la phase mobile est un tampon et la phase stationnaire est une résine composée de billes. Il se compose généralement d'agarose réticulé emballé dans une colonne cylindrique en verre ou en plastique.
Figure 01: Appareil FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography)
Dans la plupart des stratégies FLPC, la résine échangeuse d'ions est utilisée. Par conséquent, la protéine d'intérêt se liera à la résine par une interaction de charge. La technique FLPC utilise également deux tampons: le tampon 1 (le tampon courant) et le tampon 2 (le tampon d'élution). Initialement, lors de l'exécution du tampon et du mélange d'échantillons dans la colonne, la protéine d'intérêt dans le mélange se lie à la résine par une interaction de charge. Mais la protéine d'intérêt se dissocie et retourne dans la solution dans le tampon d'élution lorsque le tampon d'élution traverse la colonne à la fin du processus. Plus tard, la solution (éluant qui contient la protéine d'intérêt) passe à travers deux détecteurs, qui mesurent la concentration en sel et la concentration en protéine. Au fur et à mesure que chaque protéine est éluée, elle apparaît sous la forme d'un "pic" lors de la détection et peut être collectée pour une utilisation ultérieure.
Qu'est-ce que la CLHP ?
HPLC est un type de chromatographie liquide qui sépare les composés de faible poids moléculaire. En 1969, le premier HPLC a été fabriqué commercialement par Waters Corporation, USA. En chromatographie liquide à haute performance (HPLC), un mélange d'échantillons (analyte) dans un solvant (phase mobile) est pompé à travers une colonne avec un matériau de garnissage chromatographique (phase stationnaire) à haute pression. Le mélange d'échantillons est transporté par un flux de gaz porteur mobile d'hélium ou d'azote.
Figure 02: HPLC (chromatographie liquide à haute performance)
Les composants du mélange d'échantillon qui ont le moins d'interaction avec la phase stationnaire ou le plus d'interaction avec la phase mobile sortiront plus rapidement de la colonne. D'autre part, les composants du mélange d'échantillon qui ont le plus d'interaction avec la phase stationnaire ou le moins d'interaction avec la phase mobile sortiront plus lentement de la colonne. Sur la base du principe d'interaction ci-dessus, les composants du mélange d'échantillons peuvent être séparés. De plus, le détecteur de l'instrument identifie chaque composant du mélange d'échantillon qui sort de la colonne. La HPLC est utilisée pour inspecter des échantillons environnementaux et biologiques afin de détecter la présence ou l'absence de composés connus, tels que des médicaments, des toxines ou des pesticides. Il est utilisé dans différentes industries telles que la pharmacie, l'environnement, la médecine légale et la chimie.
Quelles sont les similitudes entre FPLC et HPLC ?
- FPLC et HPLC sont des types de chromatographie liquide.
- Les deux sont utilisés pour séparer et identifier les échantillons biologiques.
- Ils ont une phase mobile liquide et une phase stationnaire solide.
- Les deux techniques utilisent une colonne pour traverser l'échantillon.
- Ces techniques utilisent des pompes, des détecteurs, des vannes et des logiciels pour la séparation et la détection des échantillons.
Quelle est la différence entre FPLC et HPLC ?
FPLC est un type de chromatographie liquide utilisé pour purifier de grandes biomolécules telles que des protéines, des nucléotides et des peptides. HPLC est un type de chromatographie liquide qui est utilisé pour séparer des composés de faible poids moléculaire. C'est donc la principale différence entre FPLC et HPLC. De plus, FPLC utilise des moniteurs de pH et de conductivité ainsi que des collecteurs de fractions. En revanche, la CLHP n'utilise pas de moniteurs de pH et de conductivité ni de collecteurs de fractions.
L'infographie ci-dessous répertorie davantage de différences entre FPLC et HPLC sous forme de tableau.
Résumé - FPLC vs HPLC
La chromatographie est une technique analytique de laboratoire utilisée pour la séparation des composants d'un mélange. Il est divisé en plusieurs types tels que la chromatographie sur colonne, la chromatographie en phase gazeuse, la chromatographie liquide, la chromatographie échangeuse d'ions, etc. FPLC et HPLC sont deux types de techniques de chromatographie liquide. La FPLC est un type de chromatographie liquide utilisée pour purifier de grandes biomolécules telles que des protéines, des nucléotides et des peptides. D'autre part, la HPLC est un type de chromatographie liquide utilisée pour séparer les composés de faible poids moléculaire. Voici donc le résumé de la différence entre FPLC et HPLC.
