Différence clé - Amorce avant vs inverse
La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est une méthode d'amplification de l'ADN utilisée dans les applications de biologie moléculaire. C'est une technique couramment utilisée qui fait des millions à des milliards de copies d'une séquence d'ADN particulièrement intéressante. C'est une méthode in vitro réalisée en laboratoire. La technique de PCR dépend totalement de l'ADN polymérase produite commercialement appelée polymérase Taq. Et cela nécessite également plusieurs autres composants et un bon maintien de la température. Un composant important est les amorces. Les amorces sont les courtes séquences d'ADN spécifiquement conçues pour la séquence d'ADN cible. Ils ont généralement une longueur d'environ 20 nucléotides. La Taq polymérase catalyse l'ajout de nucléotides dans une séquence de nucléotides préexistante. Par conséquent, les amorces servent de points de départ à la synthèse de nouveaux brins. La polymérase Taq ne fonctionne que dans la direction 5 'à 3', la synthèse d'ADN se produit donc dans la même direction 5' à 3'. L'ADN étant double brin, deux types d'amorces sont nécessaires en PCR. Ils sont connus sous le nom d'amorce directe et d'amorce inverse. Les amorces directes et inverses sont appelées en fonction de la direction de l'allongement de l'amorce dans l'ADN lors de la synthèse de l'ADN. L'amorce directe s'annele avec le brin d'ADN antisens et initie la synthèse du brin + ve du gène dans la direction 5 'à 3'. L'amorce inverse s'hybride avec le brin sens et initie la synthèse du brin complémentaire du brin codant; qui est -ve le brin du gène dans la direction 5'vers 3'. C'est la principale différence entre les amorces directes et inverses.
Qu'est-ce qu'une amorce directe ?
L'orientation vers l'avant est la synthèse du brin codant ou du brin sens d'un gène. La Taq polymérase catalyse la synthèse d'un nouveau brin dans la direction 5 'vers 3'. La synthèse du brin codant se produit lorsque l'amorce s'hybride avec le brin non codant ou antisens et s'allonge dans la direction 5' à 3'.
Figure 01: Amorces directes et inverses
L'amorce qui s'hybride avec le brin antisens ou le brin non codant ou le brin matrice est connue sous le nom d'amorce sens puisque l'amorce sens agit comme un point de départ pour la synthèse du codage ou du brin positif du gène. L'amorce directe a une courte séquence de nucléotides qui est complémentaire de l'extrémité flanquante 3 'du brin antisens. Il s'hybride avec le brin antisens et facilite l'ajout par la polymérase Taq de nucléotides complémentaires au brin matrice.
Qu'est-ce qu'un Reverse Primer ?
L'amorce inverse est la courte séquence d'ADN qui s'annele avec l'extrémité 3' du brin sens ou du brin codant. L'amorce inverse sert de point de départ pour synthétiser un brin complémentaire de la séquence codante ou de la séquence non codante. L'amorce inverse est conçue de manière complémentaire à l'extrémité 3 'du brin codant. Par conséquent, il s'annele avec l'extrémité flanquante 3 'du brin codant et permet à la polymérase Taq de synthétiser le brin antisens ou le brin matrice. Comme son orientation est inversée, cette amorce est étiquetée comme amorce inverse.
Les amorces inverses et directes sont importantes pour la production de millions à des milliards de copies de régions particulières de l'ADN qui sont ciblées ou intéressées.
Quelles sont les similitudes entre l'amorce avant et arrière ?
- Les amorces directes et inverses sont fabriquées à partir d'oligonucléotides.
- Les amorces directes et inverses possèdent une courte séquence de nucléotides complémentaire des extrémités flanquantes des doubles brins d'ADN.
- Les amorces directes et inverses se composent généralement de 20 nucléotides.
- Les amorces directes et inverses sont utilisées dans les réactions en chaîne par polymérase.
- Les amorces directes et inverses sont synthétisées commercialement.
- Les amorces directes et inverses sont stables en température et ont normalement une Tm similaire.
- Les amorces directes et inverses sont recuites avec les séquences d'ADN cibles.
- Les amorces directes et inverses sont conçues en fonction des réactions PCR.
- Les amorces directes et inverses servent de points de départ pour l'amplification de l'ADN.
- Les amorces inverses et directes sont importantes pour la production de millions de copies de régions particulières de séquences d'ADN ciblées ou intéressées.
Quelle est la différence entre l'amorce avant et arrière ?
Amorce avant contre amorce inverse |
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| L'amorce directe est la courte séquence d'ADN qui s'hybride avec l'extrémité 3' du brin non codant ou le brin matrice du gène et sert de point de départ pour synthétiser la séquence codante. | L'amorce inverse est la courte séquence d'ADN qui s'hybride avec l'extrémité 3' du brin codant ou non modèle et sert de point de départ pour synthétiser la séquence non codante. |
| Recuit Brin | |
| Recuire l'amorce directe avec le brin modèle. | Reverse primer recuit avec le brin non modèle. |
| Nouvelle séquence résultante | |
| L'amorce directe facilite la synthèse de la séquence codante. | L'amorce inverse facilite la synthèse de la séquence non codante. |
Résumé - Avant vs Reverse Primer
Il existe deux types d'amorces impliquées dans la technique PCR. Ce sont des amorces directes et inverses. Sur la base de l'allongement de l'amorce dans la synthèse de nouveaux brins d'ADN, ces amorces sont marquées ou nommées. La Taq polymérase synthétise le nouvel ADN en orientation 5' vers 3'. Par conséquent, les amorces sont conçues comme complémentaires aux extrémités 3 'des doubles brins. L'amorce directe qui s'allonge dans la direction 5' à 3' s'hybride avec l'extrémité 3' de l'antisens ou de la matrice ou de la séquence non codante. Il sert de point de départ pour synthétiser la séquence codante. L'amorce inverse qui s'allonge dans la direction 5 'à 3' s'hybride avec l'extrémité 3' du codage ou la non-matrice ou le brin sens. Il sert de point de départ pour synthétiser la séquence non codante. C'est la différence entre l'amorce directe et inverse.
