PCR vs PCR en temps réel
PCR ou réaction en chaîne par polymérase est une découverte révolutionnaire dans la biologie moléculaire moderne, qui a été développée pour la première fois par le chimiste Kary Mullis en 1983. Elle permet d'amplifier une séquence unique dans un ADN complexe pour l'analyser. L'idée de base de la PCR est que deux amorces, qui sont complémentaires des brins opposés d'une séquence d'ADN, sont orientées l'une vers l'autre; les amorces produisent des brins complémentaires, chacun contenant l'autre amorce. Par conséquent, le résultat est une grande quantité d'une séquence correspondant à l'ADN qui se trouve entre les deux amorces. L'enzyme ADN polymérase est utilisée pour étendre les amorces dans la PCR. L'ADN polymérase est une enzyme thermostable, et elle a la capacité de survivre à des températures élevées (94 à 95 °C) utilisées pour la dénaturation de l'ADN matrice.
La PCR implique trois étapes, à savoir des cycles répétés de dénaturation, l'hybridation des amorces et la synthèse de l'ADN. Une machine thermocycleur est utilisée pour effectuer cette réaction afin qu'elle puisse être programmée pour changer les températures rapidement et avec précision. Les applications de la PCR sont les enquêtes criminelles, l'empreinte ADN, la détection d'agents pathogènes et l'analyse de l'ADN des premières espèces humaines.
Qu'est-ce que la PCR conventionnelle ?
Il y a trois étapes principales de la PCR conventionnelle, à savoir; Étape d'amplification de l'ADN, séparation de la PCR et détection des produits. La séparation des segments d'ADN est généralement effectuée par électrophorèse sur gel d'agarose. Les produits sont ensuite colorés au bromure d'étheidum. Enfin, la détection est réalisée par visualisation des bandes sur des gels sous lumière UV. Par conséquent, les résultats finaux de la PCR conventionnelle ne sont pas exprimés en chiffres. Normalement, la PCR conventionnelle ne peut détecter qu'un seul paramètre.
Qu'est-ce que la PCR en temps réel ?
La PCR en temps réel peut détecter l'amplification des produits, au fur et à mesure que les produits sont synthétisés. Avec le développement de la technologie, la PCR est devenue une technique très populaire, notamment pour la détection et l'identification des bactéries dans les aliments. La PCR en temps réel utilise un système de colorant fluorescent et un thermocycleur équipé d'une capacité de détection fluorescente.
Quelle est la différence entre la PCR conventionnelle et la PCR en temps réel ?
• La PCR conventionnelle prend plus de temps car elle utilise l'électrophorèse sur gel pour analyser les produits de PCR amplifiés. En revanche, la PCR en temps réel prend moins de temps car elle peut détecter les amplifications au cours des premières phases de la réaction.
• La PCR en temps réel collecte des données lors de la phase de croissance exponentielle de la PCR tandis que la PCR traditionnelle collecte des données au point final de la réaction.
• Les résultats du point final de la PCR conventionnelle peuvent ne pas être très précis, mais les résultats de la PCR en temps réel sont très précis.
• La PCR en temps réel est plus sensible que la PCR conventionnelle.
• La PCR conventionnelle a une très faible résolution tandis que la PCR en temps réel peut détecter très peu de changements en raison de la haute résolution.
• La détection du point final de la PCR conventionnelle a une plage dynamique courte tandis que la détection PCR en temps réel a une large plage dynamique.
• Contrairement à la PCR conventionnelle, les techniques de détection automatisées se trouvent dans la PCR en temps réel.
• La PCR conventionnelle est très sophistiquée et demande plus de travail que la PCR en temps réel.
• Contrairement à la PCR en temps réel, la PCR conventionnelle ne peut pas faire la distinction entre les bactéries mortes et vivantes.
• La PCR en temps réel utilise un système de colorant fluorescent pour détecter les produits, tandis que la PCR conventionnelle utilise le bromure d'éthidium et la lumière UV pour visualiser les bandes dans le milieu de gel d'agarose.
