Différence clé - Gram Stain vs Acid Fast
Les bactéries sont de très petits micro-organismes. Ils sont transparents et leur détection est difficile dans des conditions vivantes et non colorées. Ainsi, diverses méthodes de coloration sont développées pour faciliter la détection bactérienne. Il existe trois principaux types de techniques de coloration: la coloration simple, la coloration différentielle et la coloration structurelle. La coloration différentielle est une technique qui utilise plusieurs colorants pour différencier les bactéries. La coloration de Gram et la coloration acido-résistante sont plus communément appelées colorations différentielles. La coloration de Gram est une technique de coloration différentielle qui sépare les bactéries en deux groupes appelés bactéries Gram-positives et bactéries Gram-négatives. La coloration acido-résistante est une coloration différentielle utilisée pour identifier les organismes acido-résistants tels que Mycobacterium à partir d'organismes non acido-résistants. C'est la principale différence entre la coloration de Gram et la coloration acido-résistante.
Qu'est-ce que la coloration de Gram ?
La coloration de Gram est une importante technique de coloration différentielle utilisée pour l'identification bactérienne en microbiologie. Cette technique a été introduite par le bactériologiste danois Hans Christian Gram en 1884. La coloration de Gram classe les bactéries en deux grands groupes nommés Gram positif et Gram négatif, qui sont très importants dans la classification et l'identification des bactéries. Les microbiologistes effectuent la coloration de Gram comme première étape de la caractérisation bactérienne au cours de leurs études.
Les bactéries sont regroupées en fonction des différences entre leurs parois cellulaires. Les bactéries Gram positives sont composées d'une épaisse couche de peptidoglycane dans leur paroi cellulaire, tandis que les bactéries Gram négatives sont composées d'une fine couche de peptidoglycane dans leur paroi cellulaire. Le résultat de la coloration de Gram sera basé sur la différence d'épaisseur de la couche de peptidoglycane de la paroi cellulaire.
La coloration de Grams est réalisée à l'aide de quatre réactifs différents, à savoir; primaire, mordant, décolorant et contre-teinture. Le cristal violet et la safranine sont utilisés comme colorants primaires et contre-colorants, tandis que les grammes d'iode et d'alcool à 95% sont utilisés comme mordant et décolorant, respectivement. Les étapes de base de la coloration en grammes sont les suivantes:
- Un frottis bactérien est préparé sur une lame de verre propre, fixé à la chaleur et refroidi.
- Le frottis est inondé de cristal violet pendant 1 à 2 minutes.
- Le frottis est rincé à l'eau courante du robinet pour éliminer les taches en excès.
- Des grammes d'iode sont appliqués sur le frottis pendant 1 minute.
- Le frottis est rincé à l'eau du robinet qui coule lentement
- Le frottis est lavé avec de l'alcool à 95 % pendant 2 à 5 secondes et rincé à l'eau courante du robinet.
- Le frottis est contre-coloré avec de la safranine pendant 1 minute
- Le frottis est rincé à l'eau courante du robinet, séché et observé au microscope.
À la fin de la coloration de Gram, les bactéries à Gram négatif seront observées en rose tandis que les bactéries à Gram positif seront observées en violet.
Figure 01: Bactéries Gram négatif et Gram positif
Le résultat de la coloration en grammes est déterminé par l'épaisseur de la couche de peptidoglycane dans leur paroi cellulaire. Au cours de l'étape de décoloration, la coloration primaire et le mordant sont facilement éliminés des bactéries gram négatives et deviennent incolores car ils ont une fine couche de peptidoglycane. La coloration primaire est conservée dans les bactéries gram positives car elles ont une couche épaisse de peptidoglycane. La contre-coloration ne sera pas efficace pour les bactéries Gram positives en raison de la rétention de la coloration primaire. Ainsi, les bactéries à Gram positif seront visibles dans la couleur primaire de la tache, c'est-à-dire la couleur violette. La contre-coloration colorera les bactéries gram négatives et elles seront visibles dans la couleur de sélection, qui est la couleur de la safranine. Par conséquent, il est facile de classer les bactéries en deux groupes par coloration de Gram et cela est précieux pour la différenciation et l'identification bactériennes.
Qu'est-ce que l'acide rapide ?
La solidité aux acides est une propriété physique de certaines bactéries, en particulier leur résistance à la décoloration par les acides lors des procédures de coloration. Une fois colorés, ces organismes résistent aux procédures de décoloration à base d'acide dilué et/ou d'éthanol courantes dans de nombreux protocoles de coloration. Ainsi, le nom «acide rapide» est donné à ces organismes. Cette propriété est due à la présence d'un niveau élevé de matière cireuse (acides mycoliques) dans leurs parois cellulaires. Ce test est essentiel pour l'identification de Mycobacterium tuberculosis.
Figure 2: Mycobactéries acido-résistantes
Cette coloration acido-résistante a été développée par Paul Ehrlich en 1882. La technique acido-résistante d'Ehrlich a été modifiée par Ziehl-Neelsen et elle est maintenant utilisée plus fréquemment. La procédure de coloration acido-résistante implique trois réactifs différents. Le carbol fuschin est utilisé comme colorant primaire. L'alcool acide est utilisé comme agent décolorant. Le bleu de méthylène est utilisé comme contre-colorant. La procédure de coloration est effectuée comme suit.
- Le colorant primaire (fuchsine phéniquée) est appliqué sur l'échantillon fixé sur la lame (toutes les cellules seront colorées en rouge).
- La lame est chauffée à la vapeur pendant 5 minutes, ce qui entraîne correctement les colorants dans les cellules.
- Ensuite, la solution décolorante est ajoutée (cela élimine le colorant rouge de toutes les cellules sauf les bactéries acido-résistantes).
- Le bleu de méthylène est ajouté comme contre-colorant (il colore toutes les cellules bactériennes décolorées).
- Les bactéries acido-résistantes restent rouges tandis que les bactéries non-acides-rapides se colorent en bleu.
Quelles sont les similitudes entre la coloration de Gram et l'acidité rapide ?
- La coloration de Gram et l'acide rapide sont deux techniques de coloration différentielle.
- Les deux techniques classent les bactéries en deux groupes.
- Les deux techniques utilisent deux teintures et une décoloration.
Quelle est la différence entre la coloration de Gram et l'acide rapide ?
Gram Stain vs Acid Fast |
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| La coloration de Gram est une technique de coloration différentielle qui sépare les bactéries en deux groupes de bactéries Gram-positives et de bactéries Gram-négatives. | La coloration acido-résistante est une coloration différentielle utilisée pour identifier les organismes acido-résistants des organismes non acido-résistants. |
| Tache primaire | |
| Le cristal violet est la coloration primaire couramment utilisée dans la coloration de Gram. | La fuchsine phénolique est le principal colorant utilisé dans le jeûne acide. |
| Agent décolorant | |
| L'alcool à 95 % est utilisé comme agent décolorant dans la coloration de Gram. | L'alcool acide est utilisé comme agent décolorant dans les acides rapides. |
| Tache de compteur | |
| La coloration de Gram utilise la safranine comme contre-coloration. | La coloration acido-résistante utilise du bleu de méthylène comme contre-coloration. |
| Observation | |
| Les bactéries Gram négatives sont observées en couleur de sélection et les bactéries Gram positives sont observées en couleur violette. | Les bactéries acido-résistantes sont observées en rouge et les bactéries non acido-résistantes sont observées en bleu. |
Résumé - Gram Stain vs Acid Fast
La visualisation des micro-organismes à l'état vivant est difficile. Par conséquent, les colorations biologiques et les procédures de coloration sont largement utilisées pour étudier leurs propriétés. La coloration différentielle est un type de technique de coloration utilisée pour différencier les bactéries. La coloration de Gram et la coloration acido-résistante sont deux techniques de coloration différentielle. La coloration de Gram différencie les bactéries gram négatives et les bactéries gram positives en fonction de l'épaisseur de leurs parois cellulaires. La coloration acido-résistante différencie les bactéries acido-résistantes des bactéries non acido-résistantes en fonction de la teneur en acide mycolique de la paroi cellulaire. C'est la différence entre l'acidité rapide et la coloration de Gram.
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